녹용에 존재하는 생리활성 성분의 구조분석에 관한 연구(I)

Abstract

The analysis of bioactive components of dear antler was performed by means of HPTLC, HPLC, and MS. The deer antler components extracted by Folch-Suzuki Partitioning of 70% deer antler ethanol-extracts were B1, B2, B3, and B4. Remnants of the 70% ethanol-extracts contained GM3 with other sorts of glycolipids. Repetitive aqueous-extraction of deer antler resulted in an effective separation of B1. Glycolipid detection with α-naphthol proved that B2 contains sugar(s). The B4 component which has the greatest bioactivity was selected to be purified by μBondapak-C_(18) column and acetonitrile/methanol/water(2:4:4, v/v/v) at 254㎚. This purification method proved ineffective according to the distinct peak patterns of FAB-MS as the matrix was vaned. In addition, this method was more sensitive to the separation of the detergent of which the structure turned out to he R-(Ch_(2)CH_(2)O)n-H. Following purification with CarboPac PA-100 column and PAD, B4 was analyzed by MS which revealed a molecular structure of m/z 662 and m/z 163. Partial structure of m/z 163 was CH_(3)-(CH_(2))_(5)-C-(CH_(2))_(2)-C-C-CH_(2)-. B4 was further purified by Preparative-TLC and anlayzed by MS. As a result, m/z 207 and m/z 827 proved to be other major components of B4 in addition to m/z 163.;본 연구에서는 녹용중에 존재하는 생리활성 성분을 HPTLC, HPLC, Mass Spectrometry등의 방법으로 분리, 분석하였다. 녹용의 70% 에탄올 추출물에 대해 Folch-Suzuki 분배법으로 추출한 녹용의 성분은 B1, B2, B3, B4이며 70% 에탄올 추출 후의 잔여물에는 GM_(3)를 비롯한 여러 종류의 당지질이 존재하였다. 녹용에 대한 반복적인 수용액 추출은 B1 추출에 효과적이었으며 당지질 검출 시약인 α-naphthol 발색 결과 B2가 당을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 생리활성에 가장 효과적인 B4성분을 선택하여 254 nm에서 μ Bondapak-C_(18)과 acetonitrile/methanol/water(2:4:4, v/v/v)를 이용해 정제한 후 FAB-MS로 분석한 결과 matrix를 glycerol로 했을 때와 3-nitrobenzylalcohol로 했을 때 서로 다른 peak pattern을 보였으며 ESI-MS 결과 이 정제법은 B4성분보다 detergent 성분을 더 민감하게 검출하는 것으로 밝혀졌다. Detergent의 구조는 R-(CH_(2)CH_(2)O)n-H로 추정되었다. CarboPac PA-100 column과 Pulsed Amperometric Detector를 이용해서 B4를 정제한 후 EI, FAB-MS로 분석한 결과 B4는 m/z 662성분과 m/z 163성분으로 분석되었으며 m/z 163성분의 일부구조가 CH_(3)-(CH_(2))_(5)-C-(CH_(2))_(2)-C-C-CH_(2)-로 밝혀졌다. Preparative Thin Layer Chromatography에 의한 정제와 FAB-MS에 의한 구조 분석 결과 B4에는 m/z 662성분 외에 m/z 207, m/z 827의 3가지 성분이 존재하는 것으로 분석되었다.