Streptomyces peucetius subsp. caesius와 S. platensis의 원형질체 융합 균주의 특성

Abstract

Streptomyces peucetius subsp. caesius와 Streptomyces platensis의 PEG를 이용한 원형질체 융합(protoplast fusion)에 의해 원균들과는 형질이 변화된 융합체(fusant)를 선별하였으며 이를 Streptomyces PPF - MS1(PPF-MS1)이라 명명하였다. Streptomyces peucetius subsp. caesius와의 외형적 형태, 배양 특성의 비교 및 최적 배지조건에 관하여 조사한 결과는 다음과 같았다. 1. S. peucetius는 액체 배지에서 균이 성장함에 따라 균액의 점도가 증가하는 반면 PPF - MS1은 S. platensis처럼 직경 0.5 - 1.5 mm의 pellet을 형성하면서 자랐으며 균액은 맑았다. 고체 배지에서의 colony색은 S. peucetius와 같았으나 형태는 S. peucetius와 유사했다. 2. PPF - MS1의 발효 생성을 양상은 S. peucetius와 동일했으며, S. platensis의 발효 산물인 oxytetracycline 계통의 물질은 생산하지 않았으나 S. peucetius에 비해 접종시기 변화, 탄소원 변화, 완충액의 변화에 따른 anthracycline생산 변동의 폭이 적은 안정한 균주였다. 3. PPF - MS1은 glucose에 의한 산성화(acidogenesis)가 S. peucetius와는 달리 일어나지 않았다. 4. PPF - MS1의 총 세포외 단백질량은 S. peucetius의 20-30% 였다. 5. PPF - MS1의 chromosomal DNA Tm은 0.2 mM NaCl존재하에서 83℃, S. peucetius는 71℃, S. platensis는 78℃였다. 6. PPF - MS1은 R2YE 액체배지 성분 중 탄소원을 sucrose 2.0%로, 질소원을 soytone 0.7%로, pH완충제를 CaCO_(3) 0.2%로, phosphate농도를 1 mM로 변형시 anthracycline생성이 가장 많았다.;An interspecific fusant strain, PPF - MS1 was obtained by protoplast fusion between S. peucetius subsp. caesius and S. platensis. We studied on the microbiological and cultural characteristics of the fusant PPF - MS1. The results were as follows. 1. In liquid medium, the viscosity of culture broth of S. peucetius increased during incubation. However, the fusant PPF - MS1 formed pellet (0.5 - 1.0 mm diameter) like S. platensis without viscosity change. On agar medium, the colony morphology of PPF - MS1 was simillar to S. platensis but the colony color was simillar to S. peucetius. 2. The fermentation products of the fusant PPF - MS1 was identical with S. peucetius, but its production of anthracycline was more stable than S. peucetius under various conditions. 3. Total extracellular protein concentration of PPP - MS1 was 20 - 30% of S. peucetius and the Tm·s of DNA isolated from S. peucetius, S. platensis and the fusant PPF - MS1 were 71℃, 78℃ and 83℃, respectively. 4, The optimal medium composition for anthracycline production by the fusant PPF - MS1 as follows; sucrose 2.0%, glucose 1.0%, soytone 0.7%, CaCO_(3) 0.2%, phosphate 1 mM, casamino acid 0.01%, K_(2)SO_(4) 0.025%, MgCl_(2) 6H_(2)O 1.024%, 5M CaCl_(2) 5H_(2)O 0.4 ml, IN NaOH 0.7 ml, 20% L-proline 1.5 ml. In this condition, the productivity of anthracycline was 80 - 100 μg/ml.