Cytochrome P450 IA1 유전자 발현 조절부위의 cloning과 UDPGTm-1 유전자 발현 조절에 관한 연구

Abstract

1. Exonuclease Ⅲ를 이용한 송어 cytochrome P450 IA1 5'-upstream 조절인자 의 deletion 본 논문에서는 cytochrome P450 IA1 유전자의 5'-upstream 조절 부위의 클로닝을 실시하였다. pUC19 vector에 연결시킨 3.4 Kb 크기의 Pst1 DNA조각을 Sst1, Nco1 제한 효소로 자른 뒤, Exonuclease Ⅲ를 처리하여 약 200bp씩의 차이를 갖는 여러 크기의 plasmid들을 얻었다. 이 plasmid의 핵산서열을 알아보기 위해 dideoxy nucleotide를 이용한 sequencing방법으로 그 핵산서열의 결정 실험을 시도하였다. 2. 생쥐 간 UDP-glucuronosyltransferase 유전자의 발현 조절에 미치는 3-methylcholanthrene의 영향 다환상 방향족 탄화수소 화합물에 반응성을 갖는 C57BL/6N생쥐와 반응성을 갖지않는 DBA/2N 생쥐에 있어 phase Ⅱ 대사 효소인 UDP-glucuronosyltransferase 효소활성에 대한 3-methylcholanthrene의 영향을 알아보기 위해 C57BL/6N 생쥐와 DBA/2N 생쥐에 각각 다른 농도의 3-methylcholanthrene을 처리하거나 각기 다른 시간에 3-methylcholanthrene를 처리하였다. 그 결과UDP-glucuronosyltransferase의 mRNA가3-methylcholanthrene 양의 증가에 따라, 처치 시간이 길어짐에 따라 증가되어지며 그 mRNA의 크기는 약 2.2Kb 정도임을 알았다. 이로부터 UDP-glucuronosyltransferase또한 cytochrome P450와 함께 다환상 방향족 탄화수소 화합물 조절인자를 통한 조절을 받을 것이며 phase Ⅰ, phase Ⅱ 약물 대사 효소가 조절상 밀접한 관련을 가짐을 예측할 수 있었다.;1. Exonuclease Ⅲ deletion of Trout cytochrome P450 IA1 5' upstream regulatory element The cloning of the upstream regulatory region of cytochrome P450 IA1 gene has been carried out. 3.4 Kb Pst1 fragment DNA which was subcloned into pUC19 vector was digested with Sst1-Nco1 and after the Exonucleas Ⅲ deletion of these digested plasmid, the DNA sequencing of this cytochrome P450 IA1 upstream region was conducted. 2. Effect of 3-methylcholanthrene on the expression of nlouse UDP-glucuronosy1transferase Different dose of 3-methylcholsnthrene treatment change the amount of UDP-glucuronosyltransferase mRNA with dose dependent and time dependent manner in C57BL/6N mouseliver that contains high level of arylhydrocarbon receptor. Whereas in the DBA/2N mouse liver where arylhydrocarbon receptor level is undetectable, no effect of 3-methylcholanthrene treatment was observed. The northern blot hybridization analysis of UDP-glucuronosyltransferase mRNA has revealed that UDP-glucuronosyltransferase mRNA ran little bit slower than 18S ribosomal RNA in C57BL/6N mouse liver. These results sugest that UDP-glucuronosyltransferase may also be controlled via Ah-locus.