녹용의 성분 구조분석과 조혈모세포 촉진인자 개발

Abstract

본 연구에서는 녹용 성분에 대한 계통적인 분석체계를 구축하였으며 조혈모세포촉진 작용이 있는 성분을 찾아 분리 구조 분석하였다. 녹용은 용매 추출법에 의해 hexane, chloroform 및 70% ethanol 세 단계로 추출을 실시하였고 그 중 in vitro에서 조혈모세포촉진 작용이 있는 클로로포름층과 에탄올층을 silica gel column chromatography로 정제하였다. 정제되어 가는 과정은 HPTLC에서 전개시킨 후 요오드 증기를 쬐어 확인하였다. 클로로포름층에서 최종 정제된 물질은 in vitro 분석에서 조혈모세포 증식작용에 탁월한 효과가 있음을 알았고 이것의 구조를 FAB-MS, Tandem-MS, NMR spectroscopy등을 통하여 분석하였다. 그 결과 이 물질의 분자량은 636이었고 16:0, 18:1의 fatty acid를 가진 triacylglyceride(1-9-Octadecenoyl-2-Hexadecanoyl-3-acetylglyceride)이었다. 이 화합물을 전구체를 사용하여 다량으로 합성하여 in vivo 분석을 한 결과 탁월한 조혈모세포 증식작용이 있음을 확인할 수 있었다. 또한 계란으로부터 전구체를 분리, 합성하여 구조를 분석한 결과 16:0, 18:2의 fatty acid를 가진 triacylglyceride(1-Hexadecanoyl-2-9,12-Octadecadienoyl-3-acetylglyceride)가 합성되었음을 알 수 있었고 조혈모세포 증식작용뿐만 아니라 혈소판 전구세포의 촉진기능도 가지고 있었다. 녹용의 클로로포름층에서 콜레스테롤을 분리, 정제하였다. Silica gel column chromatography를 통해 정제하였으며 구조는 GC-MS와 NMR을 사용하여 분석하였다. 녹용의 에탄올층에서 인슐린 분비 촉진기능을 하는 성분을 silica gel column chromatography를 이용하여 정제하였고 그 중 한 성분을 최종 분리하여 FAB-MS, Tandem-MS, NMR 등을 사용하여 구조 분석하였다. 이 물질의 분자량은 418이고 -NH기와 카르보닐기(C=O)를 가지고 있다.;The components from deer antler were analyzed and the components bio-active on Hematopoietic stem cells were identified. Cervus nippon was extracted with hexane, chloroform and 70% ethanol. The chloroform and the 70% ethanol extracts were further purified by silica gel column Chromatography and the eluate from each purification steps were analyzed by high performance thin layer chromatography. One of chloroform extracts(CN-C-2-E-a-Mi) was identified to be active on hematopoietic stem cells in vitro. This was analyzed by fast atom bombardment mass spectrometry, one dimensional magnetic resonance spectroscopy and two dimensional magnetic resonance spectroscopy. CN-C-2-E-a-Mi was identified to be 1 -9-Octadecenoyl-2-Hexadecanoyl-3-acetylglyceride. Chemically synthesized KJ-l(1-9-Octadecenoyl-2-Hexadecanoyl-3-aceylglyceride), KJ-2(1-Hexadecanoyl-2-9-Octadecenoyl-3-acetylglyceride) and KJ-3(1-Hexadecanoyl-2-9,12- Octadecadienoyl-3-acetylglyceride) were also active, confirming the bio-activity of these compounds on hematopoietic stem cells in vivo. Other chloroform extracts(CN-C-4-D-a) was identified as cholesterol by gas chromatography-mass spectroscopy and one dimensional magnetic resonance spectroscopy. One of 70% ethanol extracts(CN-E-7-D-d-1) from Cervus nippon induced insulin release in rat pancreatic islets. From the analysis by fast atom bombardment mass spectrometry, one dimensional magnetic resonance spectroscopy. A molecular weight of this component was m/z 418 and it appears to possess at least one carbonyl(C=O) group and decoupled -NH_(2) group. More structural analysis of this compound is under way.