Human KIF4 유전자의 분리, 염기 서열 분석 및 그 발현

Abstract

RT-PCR과 lambda cDNA library screening의 방법으로 murine kinesin superfamily 4 (mKIF4)와 유사한 human cDNA가 착인되었는데 이는 60 base pair의 5 untranslated region (UTR), 1,232 amino acid를 coding 하는 open reading frame과 poly A^+ tail을 포함하는 3 UTR로 이루어졌다. Human kinesin superfamily (hKIF4)는 여러 가지 human cell line에서 5.0 kilabase pair 크기의 transcript와 140 kilodalton 크기의 protein으로 발현되었다. 그러나 tissue blot을 사용한 분석으로 hematopoietic tissue에서 선별적으로 발현되는 양상을 보였다. mKIF4와 sequence를 비교하였을 때 protein 수준에서는 86 %, DNA 수준에서는 84 %의 homology를 보였다. 그리고 cargo-binding이라고 추정할 수 있는 부위에서 그 유사성이 보이지 않는 부분이 있어 binding specificity가 mKIF4와 다를지도 모른다고 짐작된다. 또한 96bp가 결핍된 hKIF4의 짧은 형태도 발견되는데 genomic PCR 결과 이는 하나의 동일한 gene으로부터 생성되어 alternative splicing 과정을 거친 것이라기보다는 두 개의 다른 gene으로부터 유래한 것이라는 결론을 내렸다. ; A human cDNA homologue of marine kinesis super family 4 (mKIF4) was identified by using RT-PCR and lambda Cdna library screening. It consisted by of 60 bp 5’ untranslation region (UTR), an open feeding frame encoding 1,232 amino acids and the entire 3’ UTR. The comparison of the sequence with that of mKIF4 revealed 84% and 86% of homology at the level of DNA and protein, respectively. Human KIF4 (h KIF4) was expressed as a single human cell lines. However, it was preferentially expressed on hematopoietic tissues when it was analyzed using tissue blot. There existed some dissimilarity in the putative cargo-binding domain, which might affect binding specificities. A shorter form of human KIF4 (h KIF4_s) containing an internal deletion of 96 nucleotides was also detected. Genomic PCR indicated that two kinds of KIF4 transcript resulted from two different loci on the chromosome, rather than an alternative splicing of a single gene.