녹용에 존재하는 항진균성분과 Benzodiazepine수용체 효현 활성성분의 분리, 정제 및 구조 분석

Abstract

녹용은 한방에서 강장제로 사용되고 있으며 신체의 전반적인 면역기능의 증가와 세포성 및 체액성 면역기능의 증강, macrophage의 활성화등에 관여한다는 연구 보고가 있다. 그러나 녹용의 면역 증진 혹은 병의 저항성 증가 활성이 숙주 세포를 활성화 시킴에 의한 것인지 혹은 균의 생리 활성을 저하시킴에 따른 것인지에 대해서는 전혀 연구가 되어 있지 않다. 본 연구에서는 녹용에서 항진균 작용이 있는 성분을 찾아 분리, 구조분석하였다. 녹용은 다단계 용매 추출법에 의해 Hexane. Chloroform 및 70% Ethanol 세 단계로 추출을 실시하였다. 70% Ethanol 추출물 중 기회감염성 곰팡이 질환을 일으키는 균의 일종인 Candida albicans가 발병하는데 관여하는 병원성 형태의 균사체 형성을 억제하는 항진균 성분을 분리하였다. 각 단계마다 항진균 활성도가 가장 좋은 분획을 따라 Silica Gel Column Chromatography를 사용하여 분리, 정제하였다. 최종 단일 성분을 NMR Spectrometry, FAB-Mass, Tandem-Mass, FT-IR 등을 사용하여 구조 분석한 결과 분자량 524를 갖는 stearoyl(CI8:0), oleoyl(CI8:1), linoeoyl(CI8:2), palmitoyl(CI6:0)을 포함하는 Lysophosphatidyl-choline(1-Alkyl-2-lyso-sn-glycero-3phosphatidylcholine) 임을 확인하였다. 생물과학과 진균학 연구실과 공동으로 항진균 활성도를 검증한 결과 이 물질은 균사체 형성정도를 99.7% 억제함을 확인하였다. 또한, 진정 효과가 있다고 알려진 녹용의 성분을 찾기 위해, 70% Ethanol 추출물 중에서 GABA_A-Benzodiazepine 수용체 복합체에 대한 효현 활성을 나타내는 분획을 Silica Gel Column Chromatography를 이용하여 분리, 정제하였고, NMR Spectrometry, FAB-Mass, Tandem Mass, FT-IR을 이용해 분자량 282의 항경련 효과가 있는 Oleic Acid를 구조분석하였다. ; Deer antler has been recognized as one of the most effective invigorant and the enhancer of resistance to infectious disease among traditional medicine. Cervus nippon was extracted with hexane, chloroform, 70% Ethanol. The 70% ethanol extract were further purified by silicagel column chromatograuhv and the eluate from each purification steps were analyzed by high performance thin layer chromatography. Candida albicans is an opportunistic pathogen to be responsible for the Candidiasis by invading the epithelial cells with hyphae. pathogenic form. In this study. the component(CN-Es-6s-F-d) of 70% ethanol extracts suppressed the hyphal transition activity. This component was analzed by FAB mass. Tadem mass. NMR spectrometry. FT-IR and identified to be Lysophophatidylcholine(1-Alkyl-2-lyso-sn-glycero-3phosphatidylcholine) containing stearovl(C18:0). oleoyl(C18:1), linoeoyl(C18:2), palmitoyl(C16:0). Deer antler has been also used as an anticonvusant. One fraction of 70% ethanol extracts(CN-Es-2-B-Ms-c-Hs-III) showed an agonistic activity to the benzodiazepine receptor and was isolated by silica gel column chromatography. Oleic acid was identified by FAB mass, Tadem mass, NMR spectrometry, FT-IR and had an anticonvusant activity in vitro.