새로운 Human Kinesin의 cloning

Abstract

Kinesin은 mircotubule을 매개로 organelle의 trafficking, 세포분열 시 염색체의 이동, mRNA의 localization등에 역할을 하는 motor protein 으로 종마다 많은 종류가 존재하고 각각의 kinesin들은 각기 그 기능이 다양하고 발현되는 조직이나 세포 내 위치 등에서 차이가 난다. Placenta, neuron, neuroblast 의 cDNA에서 kinesin의 motor domain이 가지고 있는 보존된 아미노산 서열인 GKT(Y,H)TM, DLAGSE로 degenerate oligonucleotide primer를 제작하여 PCR 하고 cloning해 새로운 human kinesins를 찾았다. 그 결과 14개의 알려진 kinesin 을 sequecing했으며 kinesin domain 을 가지고 있는 4개의 새로운 유전자가 골라졌다. 첫번째 유전자는 motor domain 이 중간에 위치한 subfamily인 KinI과 유사성이 있었다. 다른 두개는 서로 75%의 유사성이 있으면서 KIP3 subfamily에 속하는 유전자들과 유사성이 있었다. 나머지 하나는 murine의 KIF1B와 매우 유사했다. 네 유전자의 Northern hybridization을 수행한 결과 세 번째로 찾은 유전자인 Klp67aR1이 HeLa cell 에서 발현이 확인되었다.;Kinesins play important roles in organelle transport and cell division. So far, about 280 kinesin isologs have been identified from various species ranging from fungi to human. These molecules share a conserved motor domain. .In this work, four oligonucliotide primers were synthesized that correspond to the regions of the motor domain. After a human cDNAs of placenta, neuron, neuroblast were amplified with the primers, correct size of PCR product were isoloated, cloned at T-vector and sequenced. Four novel human kinesins(KIF2R, Klp67aR1, Klp67aR2, KIF1B) were identified : KIF2R was related to human KIF2 ; Klp67aR1 and Klp67aR2 were related to drosophila Klp67a ; KIF1B was homologous to murine KIF1B. Of these, the mRNA expression were detected as a band of 8Kb in HeLa cell.