Coumarin 및 그 유도체가 흰쥐의 간조직 microsome 내 Cytochrome P-450에 미치는 영향 및 그 isozyme의 분리

Abstract

Coumarin은 식품, 담배 및 화장품 공업에서 가향료로서 널리 이용되고 있으며 유도체인 warfarin 및 bromadiolon은 항혈액응고제로서 살서제등으로 널리 사용되고 있다. 이들은 치환기에 있어 acetonyl과 bromophenyl hydrophenethyl기만이 서로 다르다. 이와 같은 coumarins에 의한 Cyt.P-450의 유도효과가 보고되어 있으며, 치환기 및 위치에 따른 서로 상이한 isozyme들이 유도되었음이 보고되어있다. 이에 본 실험에서는 coumarin 및 치환기가 다른 warfarin과 bromadiolon이 간조직 microsome내 Cyt.P-450, NADPH-Cytochrome C reductase에 미치는 영향과 모체화합물과 많은 변화를 보이는 유도체에 의해 유도되는 isozyme을 관찰하여, 다음의 결과들을 얻었다. 1. Cytochrome P-450의 함량은 정상군에 비해 coumarin과 bromadiolon 투여군의 경우 약 2배인 208.6%와 205.7%로 각각 증가되었으며, warfarin 투여군의 경우는 약 3배인 291.4%로 증가되었다. 2. NADPH-Cytochrome C reductase의 함량은 정상군에 비해 coumarin과 bromadiolon 투여군이 각각 124.3%와 122.8%로 증가되었으나 통계학적 의의는 없었으며, warfarin 투여군의 경우는 189.6%로 통계학적 의의 있는 증가를 보였다. 3. Octyl Sepharose CL-4B hydrophobic chromatography로 정제한것을 전기영동상에서 전개시켜 정상군에서는 50.8 Kd의 1개의 band만을 얻었으나 coumarin 투여군의 경우는 51.3 Kd 와 55.2 Kd 의 2개의 band로 분리되었고 warfarin 투여군의 경우 50.8 Kd, 54.6 Kd, 57.2 Kd의 3개의 band가 관찰되었다. 이상의 실험결과로 이들 화합물들에 의해 microsomal electron transport system이 증가되는 것과 Cytochrome P-450의 isozyme들이 유도되는 것을 확인할 수 있었다.;The cytochrome enzyme system of hepatic microsome is important because of its versatility in catalysing the hydroxylation as well as other modification of lipids and foreign compounds including drugs, pesticides and carcinogens. This system has cytochrome P-450 as the terminal oxidase. The present study was undertaken to demonstrate the effects of coumarin and the derivatives on hepatic microsomal cytochrome P-450 and NADPH-Cytochrome C reductase and to purify induced isozymes by the compounds. The results are followings; 1. Oral administration of coumarin, warfarin and bromadiolon increased hepatic cytochrome P-450 twice, three times and twice as much as control group, respectively. 2. When coumarin, warfarin and bromadiolon were administered, NADPH- Cytochrome C reductase was increased as compared with control group. 3. The cytochrome P-450 was purified partially by Octyl Sepharose CL-4B hydrophobic chromatography and isozymes were separated by electophoresis. The molecular weights were 50.8Kd in control group, 51.3Kd and 55.2Kd in coumarin pretreated group and 50.8Kd, 54.6Kd and 57.2Kd in warfarin pretreated group.