키메릭 바이러스를 이용한 폴리오바이러스 ?시드와 융합된 B형 간염바이러스 표면항원의 발현

Abstract

It has been established that the capsid of poliovirus type 1 can be extensively modified to incorporate antigenic domains from other serotypes and from unrelated viruses. The possibility that modified(chimeric) virus exhibits dual antigenicity and immunogenicity was explored using the Sabin vaccine strain of poliovirus type 1 as vector for the presentation of antigenic epitope derived from hepatitis B virus surface antigen. Chimeric poliovirus, pSBV-69 recovered from transfection of recombinant plasmid, pSBS-69 in which the coding region of antigenic site 1(bB-bC loop in VP1 capsid protein) of poliovirus Sabin 1 strain was replaced with the sequence derived from a epitope of hepatitis B virus surface antigen. Cytopathic effect(CPE) was observed in monkey’s kidney derived cell line, vero cells after transfection of pSBS-69 or it’s RNA transcript. The sequence anlysis of products from reverse transcription ? polymerase chain reaction(RT-PCR) of the cytopathic cells represented the chimeric poliovirus, SBV-69 contained genomic region corresponding to the epitope of hepatitis B surface antigen. In enzyme linked immunosorbent assay, SBV-69 virus represented specificity against rabbit anti-hepatitis B virus surface antigen antibody as welll as rabbit anti poliovirus antibody. Rabbit anti- SBV-69 virus antibody demonstrated specificity against hepatitis B virus surface antigen. It was suggested that the epitope of hepatitis B surface antigen was expressed in the poliovirus capsid. ; 폴리오바이러스 캡시드 단백질 VPI에 존재하는 항원위치 1에서 B형 간염바이러스 표면항원 epitope의 피환 발현 가능성을 검토하고자 폴리오바이러스 Sabin strain 1의 전체 cDNA가 포함된 viral shuttle vector인 pSI(T7)0과 B형 간염바이러스 표면항원epitope를 암호화하는 합성 nucleotide oligomer로부터 recombinant plasmid pSBS-69를 구성하였다. pSBS-69 plasmid 또는 pSBS-69를 in vitro transcription에 의해 생산된 RNA transcript를 원숭이 신장세포인 vero cell에 transfection시켜 4일 후에 세포병변효과(cytopathic effect)를 확인하였고 세포병변효과를 나타낸 세포액으로부터 키메릭 폴리오바이러스 pSBS-69를 cesium chloride 농도구배에 의한 초고속 원심분리에 의해 정제하였다. 정제된 pSBS-69 virus는 polyacrylamide gel electrophoresis에 의해 확인하였다. pSBS-69의 RNA transcript를 transfection시켜 세포병변효과를 나타낸 세포액으로부터 RNA를 분리하고 polymerase chain reaction(PCR)을 수행하였다. PCR product의 염기서열을 분석하여 폴리오바이러스 캡시드 단백질 VPI 내의 항원위치1(아미노산 서열 87-109)을 암호화하는 부위가 B형 간염바이러스 항원 epitope(아미노선 서열 93-115)을 암호화하는 부위로 치환되었음을 알 수 있었다. 키메릭 폴리오바이러스 pSBS-69를 항폴리오 바이러스 항체 및 항 B형 간염바이러스 표면항원 항체와 enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)한 결과 두 종류의 항체 모두에서 특이성을 나타내었다. 이로써 pSBS-69바이러스의 2가 항원성(dual antigenicity)를 확인할 수 있었다. pSBS-69바이러스를 토끼에 주사하여 생성된 항 pSBS-69바이러스의 항체는 B형 간염바이러스 표면항원과 ELISA한 결과 특이성을 나타냄으로써 B형 간염바이러스 표면 항원을 중화시키는 항체 생성능력을 나타내었다. 따라서 폴리오바이러스 캡시드 단백질 VPI내 항원위치 1(아미노산 서열 87-109)에서 B형 간염바이러스 표면항원 epitope(아미노산 서열 93-115)의 발현을 확인하였다.