Fluorescamine-아민 첨가 생성물의 형광 특성에 대한 아세톤 및 계면활성제의 영향

Abstract

Fluorescamine(FA)에 의한 아미노산을 포함한 1차 아민의 형광 분석법에 있어서 FA-아민 첨가 생성물의 형광 성질에 대한 아세톤과 계면 활성제의 영향을 연구하였다. FA-아민 첨가 생성물의 형광 세기는 첨가 생성물의 종류에 따라 조금씩 다른 양상을 보이지만, 대체로 아세톤 수용액에서 아세톤의 함량이 증가함에 따라 점차 증가하다가 다시 감소하는 양상을 보였다. 사용한 계면 활성제는 양이온성 계면 활성제인 Cetyltrimethylammonium bromide (CTAB)와 비이온성 계면 활성제인 Triton X-100이었다. 연구되어진 대부분의 FA-아민 첨가 생성물의 경우, 양이온성 CTAB과는 정전기적 상호작용에 의하여 결합하여 첨가 생성물의 형광 파장을 단파장쪽으로 약 10 nm 이동시켰다. 양이온성 CTAB 용액중에서 음이온성 FA-아민 첨가 생성물과 양이온 CTA^(+) 사이에 미셀전 회합현상이 관찰 되었다. CTAB의 존재하에서 대부분의 첨가 생성물의 형광 세기가 아세톤 수용액에서보다 감소 하였으나 첨가 생성물들간의 형광 세기가 평준화 되었다. 그러나 아세톤 수용액 및 수용액에서 분자내 소광 현상 때문에 다른 첨가 생성물에 비하여 형광 세기가 매우 낮은 것으로 여겨지는 Tryptophan과 Tryptamine 첨가 생성물의 형광 세기는 CTAB의 존재하에서 크게 증가하였다. 비이온성 계면 활성제인 Triton X-100은 이의 임계 미셀 농도 이상에서 소수성 인들고리를 갖는 Tryptophan 첨가 생성물과 소수성 상호 작용에 의하여 결합하여 형광 세기를 크게 증가시켰으나, CTAB과 같은 크기의 형광 세기를 증가시키려면 CTAB 보다 훨씬 높은 농도가 요구되었다. 그러나 다른 첨가 생성물의 형광 파장 및 세기에 대한 Triton X-100의 영향은 관찰되지 않았다. pH 3 이하의 산성 용액에서 Glycine 첨가 생성물의 형광 세기와 안정도는 CTAB의 존재하에서 크게 향상 되었다.;Effects of acetone and surfactants on the fluorescence of fluorescamine- amine adducts were studied in relation to the fluorometric analysis of primary amines with special emphasis on amino acids. The plots of fluorescent intensity of the adducts vs. acetone content in aqueous acetone media showed convex curves. For FA-amine adducts investigated, the adducts bind to a cationic surfactant, cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) by eletrostatic attractive force, resulting blue-shift of the emission band by ca. 10nm. The magnitude of the fluorescent intensity of adducts depend upon the concentration of CTAB, even at well below the CMC of the surfactant. This indicated formation of premicellar aggregate between the cationic CTAB and the anionic adducts. The fluorescent intensity of most FA-amine adducts was reduced by the presence of CTAB, but the photometric sensitivity of FA-amine adducts was leveled. The fluorescence intensity of tryptophan and tryptamine adducts, which Showed much weaker fluorescence than other adducts in surfactant-free solution, were greatly enhanced by the presence of CTAB, as compared to that in aqueous solution. The fluorescent intensity of tryptophan adduct was also enhanced by the presence of Triton X-100, presumably due to binding of the adduct on Triton X-100 micelle by hydrophobic interaction. But it required much higher concentration of Triton X-100. The fluorescent intensity and stability of FA-Gly adduct was enhanced by the presence of CTAB when pH of the midium is lower than 3.