Human cytomegalovirus가 human papillomavirus유전자를 함유하는 자궁경부암 세포주에 미치는 영향

Abstract

Human papillomavirus (HPV) 는 자궁경부암의 주요 원인인자로 알려져 있으나, 발암과정에서 다른 요인에 의한 협력작용이 꾸준히 연구되고 있다. 본 연구에서는 성감염인자 (sexually transmitted agents) 중 human cytomegalovirus (HCMV) 와 HPV 유전자와의 상호 작용을 사람의 자궁경부암세포인 HeLa세포와 Caski세포에서 살펴보았다. HPV18 유전자 함유 세포인 HeLa세포와 HPV16 유전자 함유 세포인 Caski세포에 human cytomegalovirus를 흡착시켰을 때 immediate early (IE) antigen은 유도되지 않는다는 것을 immunoblotting 결과로 확인할 수 있었다. Caski세포를 72시간 동안 serum을 제한하여 quiescent cell로 만든 후 HCMV를 흡착시켰을 때, 흡착 후 2시간, 4시간에서 HPV16 유전자의 발현이 증가됨을 northern blotting analysis로 확인할 수 있었으며, 또한 HeLa세포에서도 HCMV흡착에 의해 HPV18 유전자의 발현이 증가됨을 slot blotting analysis로 볼 수 있었다. HeLa세포를 quiescent cell로 만들어서 HCMV를 흡착시켰을 때 c-jun transcript는 60분 후에 최대로 증가되었고, c-Jun 단백질은 120분 후에 최대로 발현됨을 각각 northern blotting analysis와 immunoblotting으로 확인하였다. 또한 HPV18 upstream regulatory region (URR) 유전자를 삽입한 luciferase reporter gene plasmid를 c-jun plasmid와 함께 HeLa세포에 co-transfection 한 결과 c-Jun의 발현에 의해서 HPV18 E6, E7 promoter가 약 2배 활성화 되는 것을 볼 수 있었다. 또한 HCMV는 HeLa세포와 Caski세포에 각각 흡착 시 1시간 후부터 24시간까지 72 kDa type IV collagenase (MMP-2) 발현이 억제되었다. 그러나 HPV유전자를 함유하지 않는 Vero세포에서도 HCMV에 의한 72 kDa type IV collagenase의 발현저해는 나타나므로, 이러한 발현억제 현상은 HPV유전자와는 무관하며 HCMV에 의한 단백질 발현억제작용으로 보인다. 본 연구에서는 HCMV가 c-jun 유전자의 발현을 증가시키고, 생성이 증가된 c-Jun단백질에 의해 HPV18 URR에 위치하는 AP-1결합부위에 c-Jun의 결합이 증가됨으로써 AP-1결합부위의 downstream에 위치하는 HPV유전자의 발현이 증가됨을 제시하고 있으며, HCMV에 의한 72 kDa type IV collagenase의 발현 억제는 HPV유전자와는 무관함을 알 수 있었다. ; The effect of human cytomegalovirus (HCMV) on human cervical cancer cell lines, HeLa cells and Caski cells, was investigated. Northern blot analysis showed the increase of human papillomavirus 16 (HPV16) gene transcripts at 2 h, 4 h after HCMV adsorption in Caski cells. The stimulation of HPV18 gene by HCMV was also observed by slot blot analysis. HCMV immediate early (IE) antigens, IE1 and IE2, were not induced in HeLa cells and Caski cells, therefore, we concluded that the effect of HCMV on these cells was not due to IE antigens. HCMV adsorption induced c-jun transcription and increased c-Jun expression in HeLa cells. And co-transfection assays using c-jun expression plasmid showed that c-Jun stimulated the human papillomavirus type 18 E6, E7 promoter in HeLa cells. HCMV inhibited the expression of 72 kDa type IV collagenase in both HeLa cells and Caski cells. But this effect seems to be not related with HPV genes. According to these results, we suggest that HCMV increases c-jun expression and c-jun mediates the incerease of HPV gene expression.