노령 백서 뇌에서 Calcium binding protein 신경세포의 분포에 관한 면역조직 화학적 연구

Abstract

The purpose of this study is to observe changes of distribution, number, morphology of calbindin D 28K- and parvalbumin immunoreactive neuron in brain of aging rat and comparing this finding to adult rat to approach to etiology of aging process. All of the brains（10 for control, 10 for aging）studied were perfused with 4% paraformaldehyde through the ventricle. Subjects were cutted by 4-6㎜ thickness and immersed in fixative. The post fixed blocks were cryocut into 40㎛ thick sections and immunohistochemical staining was done by free floating method. The dilution proportions of antibody were 1:10,000 for calbindin D 28K and parvalbumin. The immunoperoxidase staining was performed using the avidin-biotin-peroxidase technique. Major findings of this study were as follows: 1. Comparing to control subjects, there were reductions of number and immunolabeling of calbindin D 28K immunoreactive neurons of aging rats in hippocampus, corpus striatum, amygdala, substantia nigra, superior colliculus and cerebellum. 2. Parvalbumin immunoreactive neurous of aging rats were decreased in motor cortex, cingulate cortex, hippocampus, thalamus and amygdala. The decrease of calbindin D 28K- and parvalbumin immunoreactivity in aging rat neurous might be the result of modifications in intracellular calcium homeostasis and suggest the changes of acetylcholine and GABA which colocalized with this proteins in hippocampus. And the result supports the use of calcium channel blockers as therapeutic agent for cognition improvement in dementia. ; 本 硏究는 老化의 原因에 接近하고자 試圖된 硏究로써, 細胞內 칼슘과 結合하여 칼슘의 濃度를 낮추고 神經保護 作用을 하는 칼슘 結合 蛋白質 중 緩衝劑 蛋白質인 calbindin D 28k와 parvalbumin 含有 神經 細胞의 分布, 數 및 形態가 老化에 따라 어떠한 變化를 일으키는지 알아보기 위하여 免疫組織 化學的 硏究方法을 통하여 老齡 白鼠와 正常 對照群을 比較分析하였다. 硏究 方法은 生後 2年 以上된 老齡 白鼠에 固定液으로 4% -을 心臟을 通하여 貫流하고 腦를 摘出한 後 40㎛두께로 凍結切斷（cryocutting）하여 免疫組織化學染色（immunohistochemical staining）을 하였다. 抗體의 稀釋比率은 calbindin D 28k와 parvalbumin 모두 1:10,000 으로 하였다. Avidin-biotion complex를 使用한 ABC 方法을 이용하였다. 硏究에서 나타난 主要 結果는 다음과 같다. 1. Calbindin 含有 神經細胞의 數는 對照群에 비해 老齡白鼠에서 海馬（hippocampus）, 線條體（corpus striatum）, 扁挑（amygdala）, 黑質（substantia migra）, 위둔덕（superior colliculus）및 小腦에서 減少하였고, 大腦皮質에는 두 群間의 差異가 없었다. 2. Parvalbumin含有 神經細胞의 數와 染色性은 對照群에 比해 老齡白鼠에서 運動皮質（motor cortex）과 帶狀皮質（cingulate cortex）, 海馬, 視床（thalamus）, 扁挑에서 減少하였고, 小腦에서는 老齡群과 對照群의 差異는 없었다. 위의 사실들을 綜合하여 볼 때 老齡白鼠에서 CaBPs免疫反應性의 減少는 蛋白質이 細胞內 Ca^2+ 增加의 結果로 損傷을 받은 것으로 생각되며, 특히 海馬에서 calbindin-D 28k과 parvalbumin 反應 神經細胞의 減少는 共存하는 acetylcholine이나 GABA 神經傳達 體系의 異常을 反影하는 것으로서, 이러한 사실은 臨床的으로 認知障碍의 治療製로서 Ca^2+ 通路 遮斷劑（calcium channel blocker）의 使用 可能性을 暗示하는 것으로 判斷한다.