실험적으로 유도된 흰쥐 간의 간경변 및 간세포암종에서의 phospholipase C-yl의 발현에 관한 연구

Abstract

신호전달체계 중 중요한 물질인 Phospholipase C-γ1(이하 PLC-γ1)이 세포의 성장 및 분화와 암의 발생등에 깊이 관여한다는 것이 밝혀지면서 최근 대장암을 비롯한 다른 여러 암종에서는 PLC-γ1의 발현이 증가하는데 반하여 간세포 암종에서는 PLC-γ1의 발현이 오히려 감소함이 보고되었다. 따라서 동물에서 간세포암종의 모델을 만들고 그 전암병변인 간경변을 시간 경과에 따라 연구함으로써 간세포암종의 발생에 미치는 PLC-γ1의 역할을 밝히고자 하였고 그럼으로써 아직도 사망률이 매우 높은 종양인 간세포암종의 치료에 도움을 주는 기초자료를 제공할 수 있을 것으로 기대하였다. 한편, 암발생 억제효과가 있다고 알려진 vitamin A를 같이 투여해 봄으로써 예방적인 측면도 같이 연구하였다. 실험재료로는 N-nitrosomorpholine(이하 NNM)을 20mg/100ml로 식수에 타서 지속적으로 음용시킨 후 4개월 이후 계획에 따라 흰쥐를 희생시켜 간을 적출하였다. 동물군은 I군(NNM 단독 투여군), II군(NNM+vitamin A동시투여군), III군(vitamin A 단독 투여군), IV군(대조군)우로 나누어 실험하였다. 적출한 간은 육안검사 뒤, 반은 포르말린 고정후에 파라핀에 포매하여 병리조직학적 검색과 PLC-γ1의 면역 조직화학적 염색에 이용하였고 나머지 반은 즉시 얼려 PLC-γ1의 immunoblot에 사용하였다. 각 군간의 차이는 통계학적으로 검색하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1) I군에서는 4개월째부터, II군에서는 5개월째부터 전암병변인 간경변과 간세포암종을 관찰할 수 있었다. 2) PLC-γ1면역조직화학염색에서 간경변에서는 발현이 증가한 반면, 간세포암종에서는 그 발현이 감소함을 확인할 수 있었다. 3) immunoblot에 있어서도 간경변에서는 PLC-γ1의 발현이 증가하였고 간세포암종에서는그 발현이 감소함을 확인할 수 있었다. 4) 간세포암종의 발생은 NNM + vitamin A동시투여군에서 NNM단독 투여군보다 통계학적으로 의의있게 적게 발생함(P<0.001)을 확인하여 vitamin A의 암종발생에 있어서의 억제효과를 고려케 하는 것으로 추정되었다. NNM을 투여하여 유도한 흰쥐 간에서 간경변에서는 PLC-γ1의 발현정도가 현저하게 높아졌다가 간세포암종이 발생한 이후에는 PLC-γ1의 발현의 정도가 감소하는 등의, 정상신호전달체계의 불균형을 보이는 것으로 미루어 보다 간세포암종의 발생에 PLC-γ1을 통한 신호전달체계가 중요한 역할을 하는 것으로 사료되었다.;Phospholipase C-γ1(PLC-γ1) plays a significant role in signal transduction for cellular activity, such as proliferation and differentiation. The concept that PLC-γ1 may be involved in carcinogenesis is supported by recent observations: its expression is highly increased in breast and colon cancer, but decreased in hepatocellular carcinoma(HCC). The aim of present study was to analyze the role of PLC-γ1 in hepatic carcinogenesis. PLC-γ1 expression was studied chronologically in cirrhotic and neoplastic lesion and the preventive effect of vitamin A in HCC was examined. Seventy five Sprague-Dawley rats were treated with NNM in drinking water(20mg.100ml) and were divided into four groups: Group I received NNM alone, group II, NNM _ vitamin A, group III, vitamin A alone, and group IV received no treatment. The liver tissue obtained was investigated by gross and microscopic examination, and expression of PLC-γ1 was studies with immunohistochemistry, immunoprecipitation and immunoblot. Results are as follows: 1) The first identifiable pathologic lesion could be found at 4 months in the group I, and at 5 months in the group II. 2) The overexpression of PLC-γ1 was detectable in cirrohtic lesion, but, negative expression in HCC, in immunohistochemical study. 3) More expression of PLC-γ1 was detectable in cirrhotic lesion, bur, less in HCC, in immunoprecipitation and immunoblot study. 4) The development of HCC was so significantly low(P<0.001) in group II comparing to group I that preventive effect of vitamin A in the development of HCC could be suggested. In Conclusion, an important role of PLC-γ1 in hepatic carcinogenesis could be suggested as demonstration of the alternation of PLC-γ1 expression in preneoplastic and neoplastic lesion.