Development of Norovirus Detection Method Using Polyclonal Antibodies

Abstract

Caliciviridae 과에 속하는 노로바이러스는 전세계적으로 비세균성 식중독의 가장 큰 원인이 되는 바이러스이다. 노로바이러스 감염을 예방하는 데 가장 필수적인 것은 원인 바이러스를 신속히 검출하는 것이다. 본 연구에서는 다클론성 항체를 이용한 노로바이러스 진단 시스템을 개발하기 위하여 노로바이러스의 항원 결정 부위(epitope)를 E.coli에서 발현, 정제하였다. 항원 결정 부위로는 ORF2와 ORF3 영역에서 총 세 부분을 선택하였으며, 발현된 단백질의 항원성을 western blot으로 확인한 후 각각 마우스와 래빗에 주입하여 항체 생성을 유도하였다. 여기서 얻어진 다클론성 항체의 역가는 세 가지 항원을 이용한 간접효소면역법(enzyme-linked immunosorbant assay)으로 측정되었다. 노로바이러스에서 발현된 단백질과 노로바이러스를 접종한 우유를 항원으로 이용한 간접효소면역법에서는 ORF2-Epi 항체가 가장 높은 측정치를 나타냈고, 노로바이러스 양성 임상 시료를 항원으로 이용한 간접효소면역법에서는 ORF3 항체가 가장 높은 측정치를 나타냈다. 이 다클론성 항체들은 식품이나 임상 샘플에서 노로바이러스를 신속하게 진단, 검출하기 위한 면역학적 검정법에 활용될 수 있는 가능성을 보였으며 이를 통해 국민 건강 증진에 기여할 수 있을 것이라 사료된다.;Norovirus (NoV), which belongs to the family Caliciviridae, is one of the major causes of nonbacterial acute gastroenteritis in the world. The effective control of NoV infection begins by rapid identification of the pathogens. In this study, we purified proteins expressed from the epitope regions of NoV for development of rapid diagnosis system using polyclonal antibodies. As antigens, ORF2 and ORF3 regions were selected and their expressions were induced. The antigenicity of the purified protein was identified by western blot. Each of the purified proteins was injected into mouse and rabbit for the production of novel antibodies. The polyclonal antibody titer was tested by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and antibody against ORF2-Epi showed the lowest limit of detection at the test with purified proteins and NoV inoculated milk samples as antigens. However, antibody against ORF3 showed the highest OD value at the test with clinical specimens as antigens. Those polyclonal antibodies can be used as a potent tool in further immunoassay for the rapid detection of NoVs from food and clinical samples.