臨床檢査物에서의 嫌氣性細菌 分離에 關한 硏究

Abstract

협기성세균이 감염에 빈번히 관여되고 때로는 중독한 감염을 이르킴이 알려져있다. 임상검사물에서의 혐기성세균 분리와 동정은 환자치료를 위한 긴요한 자료가 된다. 좋은 혐기성세균 배양성적을 얻기 위하여는 검사물의 취급과 배양방법이 적절해야 한다. 혐기성세균배양에 영향을 미치는 요소의 규명은 적절한 방법을 알아내기 위해 필요하므로 이 연구에서는 보존균주를 사용해서 공기 노출의 혐기성세균에 대한 영향, 보존배지의 효과, 증균배지의 비교, 증균배지의 개량, Steel wool법의 유효성등을 실험하였다. 또한 이 연구에서는 우리 주변 환자에서의 혐기성세균 분리상황을 검토하였고 분리 균주의 항생제 감수성을 시험하여 다음 결과를 얻었다. 1. 실험된 세균중 Fusobacterium necrophorum, F.nucleatum, Peptostreptococcus anaerobius는 공기노출에 의해 가장 빨리 죽는다. 공기노출시의 온도의 영향은 4℃에서 가장 적다. 2. F.necrophorum, F.nucleatum, Ps.anaerobius는 Trypticase soy broth(TSB)에서 단시간내에 죽는다. Transport media 중의 혐기성세균은 TSB에서보다 오래 보존되며, Stuart가 Amies medium보다 보존효과가 다소 낫다. 3. 혐기성세균 증식에 있어서 Fluid thioglycollate medium(FTM)은 Brewer thioglycollate medium(BTM)보다 못하고, BTM은 Gifu anaerobic medium-semisolid(GAM-S)보다 못하다. FTM에서 Bacteroides melaninogenicus는 전혀 증식이 안되며, F.necrophorum과 F.nucleatum의 증식은 극히 불량하다. BTM에서는 B_melaninogenious가 다소 증식된다. GAM-S에서는 시험된 모든 균주의 증식이 좋다. 4. FTM이나 BTM에 Hb powder를 첨가하므로써 B.fragilis의 증식을 좋게 하며, Hb powder의 첨가량이 0.1%일때의 증식이 가장 좋다. BTM에서의 B.melaninogenicus의 증식은 대단히 느리고 불량하나, Hb powder를 첨가하므로써 증식이 촉진된다. 5. FTM에 Hb powder 0.1%와, BHI와 TSB를 각각 ¼량씩 첨가하면 B.melaninogenicus, F.necrophorum의 증식이 크게 촉진된다. 즉 Bacteroides와 Fusobacterium의 증식 촉진을 위해 Hb powder와, BHI와 TSB를 사용할 수 있다. 6. Steel wool의 single plate법은 여러 혐기성세균을 배양함에 있어 GasPak법에 거의 필적하는 결과를 보였다. Fusobacterium배양에는 좋은 결과를 얻지 못하였으므로 이 세균이외의 혐기성세균배양에 이용할 수 있는 경제적이고 간편한 방법으로 판단되었다. 7. 실험기간중 229주의 혐기성세균을 분리하였으며, 이중 82%는 무아포 혐기성세균(non-sporeforming anaerobe)이었고, 18%는 Clostridium이였다. 무아포 혐기성 세균속에는 Peptococcus(16%), Peptostreptococcus(38%), Bacteroides(23%)가 대부분을 차지하였다. 혐기성세균은 창상과 여성생식기 검사물에서 가장 많이 분리된다. 그이외 혈액, 척수액, 흉막강액, 간에서도 분리되어, 혐기성세균의 감염원인균으로서의 중요성을 나타내었다. 본 실험의 결과는 임상재료에서 흔히 나타나는 혐기성세균의 빈도를 추축할 수 있는 통계재료로 쓰일 수 있다. 8. Peptococcus와 Peptostreptococcus는 실험된 항생제에 대해 대부분의 균주가 감수성을 나타내었다. Clostridium중에는 내성을 나타내는 균주가 상당히 있었다. B.fragilis는 시험된 항생제중 chloramphenicol에는 모두 감수성이었다. B.fragilis에 유효한 항생제인 tetracycline에 감수성을 나타낸 균주가 50%뿐이었음은 내성 균주의 출현을 뜻하는 것으로 생각되며 계속적인 관찰을 필요로 한다. 그외의 항생제에 대해서는 내성을 나타내었다.;Non-sporeforming anaerobic bacteria, normal flora of human body are well known for their opportunistic invasion when they find chance. In general, non-sporeforming anaerobes are more difficult to culture than sporeforming anaerobes as they are more sensitive to air exposure or fastidious in nutrition requirement or slow in growth. For successful isolation of anaerobes, it is very important to handle specimens properly, and to use suitable medium and an anaerobic method. Isolation of anaerobes from clinical specimens and determination of antibiotic susceptibility help to choose antibiotics for the treatment of patients. In the present studies, some of the factors which affect cultivation of anaerobes were determined and the studies were made on the isolation of anaerobes from clinical specimens and antibiotic susceptibility. The following results of the present works were obtained. 1. Fusobacterium necrophorum, Fusobacterium nucleatum and Peptostreptpcoccus anaerobius were most sensitive to air exposure. The adverse effect of air exposure was minimum at 4℃. 2. F. necrophorum, F. nucleatum, and Ps. anaerobius in cotton tipped applicater wood and kept on Trypticase soy broth (TSB) survived for a only short period of time. Those kept in transport media survived longer. Stuart transport medium was better than Amies. 3. Growth of anaerobes was better in Gifu anaerobe medium, semisolid (GAM-S), intermediate in Brewer thioglycollate medium(BTM), and worse in Fluid thioglycollate medium (FTM). No growth of Bacteroides melaninogenicus, and limited growth of F. Necrophorum and F. Nucleatum were observed in FTM. BTM supported some growth of B. melaninogenicus. GAM-S supported good growth of all tested anaerobes. 4. By supplementing FTM or BTM with hemoglobin powder, better growth of Bacteroides fragilis was obtained. The amount of hemoglobin which gave good results Was 0.1% of medium. BTM supplemented with hemoglobin supported growth of B. Melaniogenicus. 5. Supplementing FTM with 0.1% of hemoglobin and ¼ strength each of BHI and TSB resulted much better growth of B. fragilis, B. melaninogenicus and F. necrophorum. 6. Steel wool method(single plate) of anaerobic culture supported growth of many of the anaerobes tested almost comparable to the result with GasPak method. However, growth of Fusobacterium was very poor with the method. 7. During the period from 1972 to 1975, 229 strains of anaerobic bacteria were isolated from clinical specimens. Of these 82% were non-sporeforming anaerobes. Most frequently isolated anaerobes were Peptococcus(16%), Peptostreptococcus(38%), and Bacteroides (23%). Frequent anaerobe isolations were made from wound and female genital specimens. Importance of anaerobic bacteria as etiologic agent was demonstrated by their isolation from blood, spinal fluid, pleuro-pulmonary, intra-abdominal and liver specimens. 8. Most strains of Peptococcus and Peptostreptococcus were susceptible to many antibiotics. Some strains of Clostridium showed resistance to some antibiotics. Although all of the B. fragilis strains were susceptible to chloramphenicol, only 50% of them were susceptible to tetracycline suggesting appearance of resistant strains.