Ethoxyresorufin deethylase 및 benzo(a)pyrene hydroxylase 효소 활성에 미치는 flavonoids 및 aminopyrine의 영향

Abstract

Effects of flavonoids and aminopyrine on ethoxyresorufin deethylase(EROD) and benzo(a)pyrene hydroxylase in B6 mouse liver, in isolated perfused rat liver system, and in B6 mouse hepatocyte Hepa-I cells were examined. In C57BL/6N mouse 3-metheylcholanthrene(3MC) treatment have resulted in the stimulation of EROD activity based on fluorometry by 2.79 fold comparing with that of control. Among the tested flavonoids 0.2μM of chrysin, morin, myricetin and aminopyrine were observed to inhibit 3MC stimulated EROD activity by 23.00% - 72.74%. The dose response studies with chrysin (0.2μM - 8 μM), morin (0.2μM - 8 μM), myricetin (0.2μM - 8 μM) and aminopyrine (0.2μM -8 μM) showed inhibition from 79,08% t 6.59% of 3MC stimulated enzyme activities, respectively. To examine these phenomina in situ system, 3MC, chryain and myricetin were perfused into Spraugue-dawely rat liver. 1.5 hours - perfusion of chrysin prior to 3MC perfusion decreased EROD activity by 28.56%, and in the case of myricetin, EROD activity was decreased by 31.42% in the same condition. Unlikely, EROD activity was not affected by 3MC and flavonoids in mouse bepatocyte cell line Hepa-1 cells. But benzo(a)pyrene activity was increased by 25 fold in the 3MC treated Hepa-1 cells compared with that of control. 3MC induced benzo(a)pyrene hydroxylase activity was decreased by 76%, 68%, 32%, 44% by concomitant treatment of chrysin, morin, myricetin, and aminopyrine, respectively.;Flavonoids(chrysin, morin, myricetin)와 aminopyrine 생쥐 소포체중의 ethoxyresrufin deethlase 효소 활성에 미치는 직접적 영향 및 3-methylcholanthrene(3MC)의 유전자 발현 상승 작용에 미치는 영향을 조사하기 위하여 C57BL/6N생쥐에 3MC의 투여로 유도된 ethoxyresorufin deethylase 효소 활성을 측정하고, chrysin, morin, myricetin, aminopyrine을 농도별로 처리한 후 효소 활성을 형광 분석법에 의해 측정하여 비교 분석하였다. 또한 적출 관류 간 실험법에 의해 3MC단독 관류시의 유도된 ethoxyresorufin deethylase 효소 활성과 flavonoids를 일정시간 관류시킨 후 3MC를 관류시켜 얻은 소포체 분획중의 ethoxyresorufin deethylase 효소 활성을 측정 비교하였다. 생쥐 간 소포체 분획중의 ethoxyresorufin deethylase 효소 활성은 3MC투여에 의해 대조군의 2.79배가 증가되고 이는 flavonoids 및 aminopyrine 의해 농도 및 종류에 따라 6.59%-79.08%감소되었다. 3MC단독 관류시 중된 ethoxyresorufin deethylase 효소 활성에 비해 chrysin관류 후 3MC관류시는 그 증가된 정도의 28.56%가, myicetin 관류 후 3MC 관류시는 31.42%가 감소되었다. 이러한 flavonoids 및 aminopyrine의 저해 작용이 배양된 조직 세포내에서도 나타나는지 알아 보기 위하여 생쥐 간조직 세포인 Hapa-1세포를 이용하여 조사하였다. 3MC단독 투여시와 flavonoids 및 aminopyrine 병용 투여시의 ethoxyresorufin deethylase 효소 활성은 대조군에 비해 유의적 변화를 보이지 않는 데 비해 benzo(a)pyrene hydroxylase의 효소 활성은 대조군에 비해 25배 증가하였으며 이 증가된 정도는 flavonoids 및 aminopyrine에 의해 32%-76%감소되었다. 이상의 결과에서 chrysin, morin, myricetin등의 flavonoide및 aminopyrine은 ethoxyresorufin deethylase 효소 활성및 benzo(a)pyrene hydroxylase 효소 활성의 직접적 저해제일 뿐 아니라 3MC에 의한 유전자 발현을 억제한다는 사실을 알 수 있다. 또한 Hepa-1세포에서는 ethexyresorufin deethylase 와 bonzo(a)pyrene hydroxylase가 유전자 발현이 달리 조절되는 동종 효소 형태로 존재한다고 사료된다.