Moderate halophiles의 분리와 생성된 단백분해효소의 특성에 관한 연구

Abstract

Halophilic bacteria were isolated and the properties of their protease were investigated. From salted and fermented sea foods (Jeotkal), 28 strains of protease producing halophilic bacteria were isolated. The isolated strains occupied 11% of moderate halophilic bacteria in the jeotkal( Shrimp jeotkal). Among them, a strain with high protease activity was selected. The selected strain was tentatively identified as Pseudomonas sp. by morphological, physiological and biochemical characteristics. The optimum NaCl concentration and temperature for growth of the strain were 1.5M and 30℃. KCl and MgCl_(2) were unable to use in the place of NaCl for the growth of the strain. The optimum culture conditions for the production of protease by the strain were at 30℃ for 24hr. in medium(pH 7.0) containing 1.0M NaCl with shaking. The protease showed a maximum activity at 50℃ and pH 9.0. The protease was stable in wide range of pH(5.0-1l.0)at room temperature and stable up to 50℃ for lhr. The enzyme was not affected by various metal ions and detergents. Especially, the enzyme was activated by Cu^(2+) and Mn^(2+) but inactivated by Hg^(2+) and PMSF(phenylmethyl-sulfonyl fluoride). The protease was purified from crude enzyme solution by acetone precipitation, DEAE-Cellulose chromatography and Sephadex G-75 chromatography.;정상적인 환경이 아닌 높은 NaCl농도에서도 충분히 생육할 수 있는 호염성 세균을 분리, 동정하고 생성된 단백분해효소의 특성을 조사하였다. 염장식품인 젓갈(새우젓)을 10%(1.7M) NaCl 식염수에 현탁하여 10% NaCl이 포함된 배지에서 배양하여 단백분해효소를 생성하는 28균주의 moderate halophiles을 분리하였다. 이 분리균들은 젓갈(새우젓)에 있는 moderate halophiles의 약 11%을 차지하였다. 이 분리균들 중 10% NaCl의 배지에서 잘 자라고 단백분해효소 활성이 높은 균주를 선별하였다. 이 균주의 형태적 생화학적 특성을 조사한 결과 Pseudomonas sp. 라고 잠정적으로 동정하였다. 이 균주의 최적 증식 NaCl 농도는 1.5M이며 최적 증식 온도는 30℃였으며 NaCl을 KCI과 MgCl_(2)로 대치했을 때 증식하지 못하였다. 이 균주의 단백분해효소 생성은 1.0M NaCl을 포함한 배지에서 24시간 동안 배양했을 때 최적인 것으로 나타났다. 이 단백분해효소 활성의 최적 PH는 9.0이고 최적 온도는 50℃이며 0.2M NaCl과 0.4M KCl에서 최적이었다. 이 효소의 활성은 넓은 범위의 PH (5.0-10.0)와 50℃까지 비교적 안정하였다. 그리고 이 균주의 단백분해효소는 아세톤 침전, DEAE-Cellulose column chromatography와 gel filtration을 통해 8배로 정제하였고 회수율은 7%였다. 이 효소는 Mn^(2+)와 Cu^(2+)에 의해서는 효소 활성이 촉진되었고 Hg^(2+)에 의해서는 저해되었으며 다양한 저해제에 대해 안정하였으나 phenylmethylsulfonyl fluoride에 의해서는 저해되었다.