냉동보존된 생쥐배아를 이용한 정도관리에 관한 연구

Abstract

These studies were carried out to investigate the optimal freezing protocol for 2 cell mouse embryos and to find the probability of quality control with 2-cell embryos frozen. The embryos showed the best survival by the protocol composed of a freezing solution with the cryoprotectants(1.5M propanediol + 0.1M sucrose), and a 2-step thawing method(room temperature, 20 sec ~ 37℃, 20 sec). The developmental ability of frozen-thaw 2-cell embryos did not differ from that of fresh 2-cell embryos in m-KRB medium with 0.4% bovine serum albumin. But development of frozen-thaw embryos was depended on the supplements of the medium. In the albumin-free medium, the developmental rate(rate of blastocysts) was significantly reduced, compared with that in the medium with 0.4% BSA. Also, when frozen-thaw embryos were cultured in the medium with human fetal cord serum(HCS), the developmental rate of frozen-thaw embryos was slightly reduced, compared with that of fresh 2-cell embryos. Finally, frozen-thaw 2-cell mouse embryos were more sensitive to the toxic agent of disposable-plastic syringe. Therefore, toxicity of medium could be effectively detected by frozen-thaw 2-cell mouse embryos. ; 본 연구는 생쥐 2세포기 배아의 적절한 동결방법을 모색하므로써 동결-융해된 생쥐 2세포기 배아에 의해 배양액을 효율적으로 정도관리 하고자 시도하였다. 생쥐 2세포기의 배아는 1.5M propanediol에 0.1M의 sucrose를 첨가한 동결보존액을 이용하여, 2단계 융해법(상온에서 20초간 노출시킨 후 37℃에서 20초간 융해하는 방법)에 의해 동결 및 융해하였을 때 최고의 생존율을 보였다. 이와같은 동결법에 의해 생쥐 2세포기의 배아를 동결한 결과 체외발생율(배반포의 비율)은 신선배아(동결하지 않는 배아)의 체외발생율과 통계적으로 유의한 차이가 없었다. 동결-융해된 배아의 체외발생율은 배양액의 첨가제에 큰 영향을 받았다. 즉, 동결-융해된 배아는 알부민이 첨가되지 않은 배양액에서 체외발생율이 현저히 감소하였을 뿐만 아니라, 혈청이 첨가된 배양액에서도 대조군(신선배아)보다도 더욱 낮은 발생율을 보였다. 마지막으로 동결-융해된 생쥐 2세포기의 배아는 일회용 프라스틱 주사기의 유독물질이 오염된 배양액에서 신선배아보다 더욱 민감한 반응을 보였다. 따라서 배양액의 유독성은 동결-융해된 생쥐 2세포기의 배아에 의해 효과적으로 정도관리 할 수 있었다.