Identification of the allergenic components of pork meat

Abstract

국내 알레르기 질환 환자에서 실시한 임상 연구결과 알레르기 유발 식품으로 밝혀진 돼지고기를 대상으로 이들에 존재하는 알레르기 유발성분을 확인하고 그 물리화학적 특성을 알아보았다. 이를 위해 신선한 돼지고기를 구입하여 crude extract와 이를 가열(30분) 처리 또는 가열 및 인공위액으로 처리(10, 30, 60분)한 분획을 조제하였다. 각각의 분획에 대하여 SDS-PAGE로써 단백질을 분리하고 임상시험결과(skin prick test 및 open food challenge test) 알레르기 양성반응을 나타낸 환자의 혈청을 사용한 immunoblot, ELISA 등을 실시함으로써 돼지고기에 존재하는 알레르겐을 확인하였다. ELISA에 의한 혈중 특이 IgE를 측정한 결과 양성반응 환자의 혈중 특이 IgE의 평균치가 음성반응 환자에 비해 약 2배를 나타내었다. Crude extract와 가열처리한 돼지고기에 대한 immunoblot 실시 결과, 양성반응 환자의 혈청과 반응성을 보인 주성분으로 66, 63, 58, 55 kDa이 관찰되었으며 알레르기 유발가능 성분으로 사료되었다. 가열 및 인공위액을 처리한 경우에는 주성분 중 55 kDa 의 성분만이 확인 가능하였다. 한편, 혈중 특이 IgG level 측정 및 IgG immunoblot 실시결과, 양성환자의 반응성은 음성환자에 비해 크게 다르지 않았다. 이상의 결과로부터, 66, 63, 58, 55 kDa의 단백질이 돼지고기 알레르기 유발성분으로 사료되며 가열 및 인공위액 처리시에도 알레르기 유발 가능성은 다소 감소하지만 남아있는 것으로 추정된다.;Pork meat has been reported as one of the foods causing allergic reactions predominantly to the Korean. To identify the potential food allergens in pork meat, sera was collected from 16 patients allergic to pork meat and 5 normal subjects after skin prick test and open food challenge test. Crude pork meat were prepared by blending raw pork meat with phosphate buffered saline(pH 7.0) and preparations heated and/or incubated with SGF (stimulated gastic fluid) were also prepared for characterization of heat-stability or resistance to digestion of food allergens. ELISA was performed to determine specific IgE antibody levels of allergic patients to pork meat, and resulted in twofold higher mean value than that of tolerated patients. Extracted proteins from pork meat were separated by SDS-PAGE, and then western blotting by using sera from pork sensitive patients and control subjects, respectively. The IgE binding response to pork meat by western blots correlated with the quantitative specific IgE value of each person. Western blots showed four prominent IgE-binding bands(66, 63, 58, 55 kDa) in crude extract and heated sample. They are overally heat-stable, but only 55 kDa protein of them was remained after SGF-treatment for 10 minutes. The IgG antibody reactivity to pork meat of sensitive patients is not significant, compared with that of normal control subjects. These results suggest that most prominent allergens from pork meat are four components(66, 63, 58, 55 kDa) in the Korean and the heat and/or SGF treatment on allergen is additional parameter to characterize allergen, and pork meat allergy is mediated by IgE antibody.