생약에서 추출한 당지질이 사람 적혈구막에 미치는 영향

Abstract

본 연구에서는 웅담, 인삼, 녹용에서 추출한 당지질(각각 HKB-94, HKG-94, HKD-94)이 사람 적혈구막에 미치는 효과를 알아보기 위하여 적혈구의 모양변화와 용혈현상을 조사하였다. 당지질은 Folch-Suzuki 방법으로 분리해서 HPTLC상에서 orcinol, resocinol 시약으로 각각 발색시켜 확인하였다. 먼저 사람 적혈구에 HKB-94를 처리했을때 농도 의존적으로 용혈 현상이 일어났다. 같은 양을 처리하여 적혈구의 모양변화를 주사형 전자현미경, 광학 현미경을 이용하여 관찰한 결과 HKB-94는 적혈구막 모양을 stomatocyte로 변화시켰으며 더 많은 HKB-94를 처리한 경우에는 spherocyte로 막모양이 완전히 변화되는 것을 볼 수 있었다. HKG-94는 적혈구를 농도 의존적으로 용혈시키기는 하였으나 0.025~0.25 g/㎖ 에 한해서만그 변화가 일어남을 알 수 있었다. 또한 적혈구 모양변화도 0.025~0.25 g/㎖ 에 한해서만 echinocyte로 변화되었다가 그보다 더 많은 양으로 처리하면 정상으로 회복되는 것을 관찰하였다. HKD-94도 농도 의존적으로 용혈현상을 보였으나 적혈구막 모양은 HKB-94와 다르게 echinocyte에서 spherocyte로 변화되었다. 적혈구막의 완전 파괴 현상은 일어나지 않았다. 그리고 혈장이 존재할 경우 적혈구 모양면화에 미치는 HKD-94의 영향을 알아보기 위하여 생리 식염수(PBS)대신 동일한 혈액으로부터 분리한 혈장을 HKD-94와 함께 적혈구막에 처리해 보았다. 그러나 이 실험조건에서는 생리 식염수 (PBS) 사용시 나타난 적혈구의 echinocyte로의 모양변화를 관찰할 수 없었다. 즉 HKD-94가 적혈구막 모양에 변화를 주는 것은 혈장 성분의 존재유무에 따라 서로 다르다는 것을 알 수 있었다. 혈장내에 존재하는 어떤 성분이 적혈구막 모양에 대한 HKD-94의 영향을 감소시키는지 알아보기 위하여 10% albumin을 생리 식염수(PBS)와 함께 적혈구에 처리해 보았으며 이 실험 결과로부터 혈장내에 존재하는 albumin이 HKD-94와 결합하여 적혈구에 끼어들어가 모양변화를 일으키는 HKD-94 의 효과를 차단시킴으로써 적혈구막 모양변화가 거의 관찰되지 않았음을 알 수 있었다. HKB-94, HKG-94 및 HKD-94의 막단백질에 대한 효과를 알아보기 위하여 ghost에 각각 일정량을 처리한 후 SDS-PAGE를 실시하였다. 그 결과 HKB-94만이 spectrin, band 2.1, band 4.1에 영향을 준다는 것을 알 수 있었다. 또한 생약의 당지질 성분이 cytosolic ATP량에 어떻게 변화를 주는지 측정한 결과 HKB-94를 처리한 적혈구에서만 약 22% ATP 감소가 나타났으며 이것은 결론적으로 HKB-94가 적혈구막내의 ATP-dependent 효소의 활성화에 간접적으로 관여한다는 것을 알 수 있었다.;The hemolytic and morphological changes of glicolipids-treated human erythrocytes were studied. Glycolipids were isolated by Folch-Suzuki Method from deer antler(HKD-94), bear bile(HKB-94) and ginseng(HKG-94). Erythrocytes suspension in phosphate buffered saline (5% hematocrit) was incubated with HKD-94, HKB-94 and HKG-94 for 3Omin at 37℃ and hemoglobin concentration in supernatant was measured at 540nm. HKD-94, HKB-94 and HKG-94-treated human erythrocytes were fixed with 5% glutaraldehyde and examined by scanning electron microscope and light microscope for morphological change. HKD-94, HKB-94 and HKG-94-treated human erythrocytes resulted in dose-dependent hemolysis. However the shape of erythrocyte changed from dismytes to echinocytes when treated with HKD-94. The effect of HKD-94 was reduced in the presence of plasma. Abnormal osmotic resistance of diabetic rat erythrocytes was recovered by HKD-94 injections for 6 days. The shape of erythrocyte from discocytes to stomatocytes when treated with HKB-94. High HKB-94 dosage destroyed the membrane structure. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of HKB-94 treated ghosts showed a significant decrease in spectrin, band 2.1 and band 4.1. It sugestes that HKB-94 may act as the detergent that dissolves the cytoskeleton protein band 4.1. HKG-94 treated human erythrocytes resulted in dose-dependent hemolysis and changed the shape of erythrocyte from discocytes to echinocytes at low HKG-94 dosage. Therefore, the glymlipids extracted from deer antler, bear bile and ginseng affected the morphological changes and hemolysis of human erythrocytes and the effect of glycolipids on human erythrocytes was different in vivo and in vitro.