F9 Teratocarcinoma Cell 분화에 따른 Small G Protein 분포의 변화

Abstract

포유류 조직에서 다양하게 발견되고 있는 small GTP binding protein ('small G protein') 의 일종으로서, 크기가 25KD,23KD,21KD 되는 protein이 F9 teratocarcinoma cell 의 막과 세포질에 존재함을 확인하였다. retinoic acid 와 dibutyl cyclic AMP 및 theophylline 을 첨가하여 F9 cell 에 분화를 유도했을때, 세포의 형태는 전체적으로 둥글게 되면서 길게 돌기가 뻗어나왔으며, laminin 의 합성도 증가됨을 확인하였다. 아울러, a-tubulin 이 세포에서 얻어 나온 돌기를 따라 분포함을 알수 있었다.뿐만 아니라, small G protein의 분포를 조사한 결과, 분화 초기보다는 분화 말기로 진행됨에 따라, 그리고 세포질에서보다는 막에서 small G protein 의 양이 증가됨을 알 수 있었다. 이 결과는 small G protein이 F9 cell 분화에 어떠한 기능을 가지고 있음을 말해 준다. F9 cell 의 분화에 대한 small G protein의 역할을 추적하는 연구를 수행하기 위하여 Bovine brain membrane 으로부터 Sephacryl S-300, phenylsepharose CL-4B, hydroxyapatite, Q-sepharose column chromatogra phy 를 차례로 실시하여, 약 631KD, 34KD 정도의 protein 과 함께, GTP binding activity 와 GTPase activity 를 갖는 25KD 크기의 small G protein 을 분리하였다.;The small GTP binding proteins ('small G proteins') with molecular weight of about 25 KD,23 KD, 21 KD were found in membrane and cytosolic fractions of F9 teratocarcinoma cells. Monolayer cultures of F9 cells induced to differentiate with retinoic acid, dibutyl cyclic AMP and theophylline showed the difference in distribution of small G protein. The amount of small G protein, measured by (α-32P)GTP binding, increased more during terminal differentiation than during early differentiation. In addition, the amount of small G protein increased more in membrane fraction than in cytosol fraction. As a preceding step to study the role in differentiation of F9 cells, small G protein was isolated from crude membrane fraction of bovine brain by succesive column chromatographies of Sephacryl S-300, phenyl sepharose CL-4B, hydroxtapat i te and Q-sepharose. The 25KD band was identified from SE-PAGE together with 63KD, 34KD band and GTP binding activity was detected only in 25KD band.