사람 태반 cytochrome p450 aromatase cDNA의 cloning

Abstract

Aromatase which converts androgen to estrogen is essential for the maintenance of pregnancy and normal sexual development of fetus. The cloning of cytochrome P450 aromatase cDNA is important ot understand the mechanism of action of this enzyme. In this study, λgt 11 human placenta cDNA library was screened with biotinylated deoxyoligonucleotide that was obtained from the most 5' region of DNA sequence from human aromatase protein. From the positive clone of quarternary screening, lambda DNA is isolated and purified. The lambda DNA was used as template DNA for PCR with λgt 11 primer and the nucleotide sequence of the cDNA was obtained from PCR reaction was analyzed. Also, mRNA form human placenta was isolated and cDNA was synthesized by reverse transcriptase. These cDNAs were used for PCR amplification with primers of human placenta cytochrome P450 aromatase. Results indicate the existence of more than one kind cDNA of cytochrome P450 aromatase at human placenta. Human placenta cytochrome P450 aromatase cDNA can be serve as a good marker for reproductive toxicity test as well as to develope the antibreast tumor agent.;Cytochrome P450 aromatase는 여성 성홀몬인 에스트로rps 생합성의 제한 효소로서 스테로이드 모핵의 A환을 방향족화시키는 작용을 하여 임신 유지 및 태아 발달에 중요한 역할을 담당하고 있다. 본 논문에서는 생식 독성의 연구에 필요한 지표로서 요구되는 사람 태반 cytochrome P450 aromatase cDNA를 클론하고자 하였다. 사람 태반으로부터 작성된 cDNA library를 oligonucleotide를 probe으로 사용하여 screening하였으며 얻어진 양성 clone으로부터 lambda DNA를 분리 정제한 후 중합효소 연쇄 반응으로 cytochrome P450 aromatase cDNA를 얻어 pBluescript에 subcloning을 하여 핵산 염기 서열을 조사하였다. 또한 사람 태반 mRNA를 분리하여 cDNA를 합성한 후 aromatase primer를 사용한 중합효소 연쇄 반응으로 aromatase cDNA를 얻어 핵산 염기 서열을 조사하였다. 그 결과 세 가지의 aromatase cDNA 조각을 얻었고 이로부터 사람 태반으로부터 한 가지 이상의 aromatase cDNA가 클론됨을 알 수 있었다.