녹용에서 면역조절물질의 정제 및 활성연구

Abstract

녹용은 한방에서 강장제로 사용하고 있으며 신체의 전반적인 면역기능의 증가와 세포성 및 체액성 면역 기능의 증강, macrophage의 활성화 등에 관여한다는 연구 보고가 있다. 그러나 녹용의 어느 성분이 면역 조절을 담당하는 지에 대해서는 연구가 미흡하다. 본 연구에서는 녹용에서 면역 조절 작용이 있는 성분을 찾아 구조 분석하였다. 녹용은 다단계 용매 추출법에 의해 hexane, chloroform 및 70% ethanol 세단계로 추출을 실시하였다. 추출물 중 면역조절 작용이 있는 성분을 ConA로 활성화된 증식 분석법을 이용하여 분리하였다. 각 단계마다 면역조절활성도가 가장 높은 분획을 따라 silica gel column chromatography로 분리, 정제하였다. 최종 분획을 FT-NMR , FAB-Mass, Tandem-Mass, FT-IR등을 사용하여 구조 분석한 결과 분자량 760 근처의 arachidonyl(C20:4), stearoyl(Cl8:1), oleoyl(Cl8:1), linoleoyl(Cl8:2), palmitoyl(Cl6:0), myristoyl(Cl4::0)을 포함하는 phosphatidylcholine class 임을 확인하였다. 녹용의 또 다른 면역조절 작용을 연구하기 위해, 기본적인 분석법을 비롯하여 항암작용을 일으키는 activated killer(AK) 세포 활성을 알아보기 위해 Iymphokine activated killer cell(LAK) 분석법을 사용하였다. 세포 증식 기전을 알아보기 위하여 flow cytometry를 이용한 세포내 Ca^(2+)농도([Ca^(2+)]_(i)) 증가의 경향을 함께 살펴보았다. 이에 대해 LAK 분석법에서 녹용추출물이 아무런 활성을 나타내지 않았고, [Ca^(2+)]_(i),를 단독으로 증가시키는 것으로 보아, [Ca^(2+)]_(i)의 증가를 통한 세포 증식 기전에 관여한다는 것을 알 수 있었다.;Deer antler has been recognized as one of the most effective invigorant and the enhancer of resistance to infectious disease among traditional medicine. Cervus elaphus was extracted with hexane, chloroform 70% ethanol. The 70% ethanol extract were further purified by silica gel column chromatography and the fraction from each purification steps were analyzed by high performance thin layer chromatography. Concanavalin A(ConA) is a mitogen of lectin classes to be responsible for the T cells by proliferating the spleen cells with thymidine incorporation. In this study, the component(CE-E-3-C-d-Ⅲ-2) of 70% ethanol extracts suppressed the immunomodultary activity by alone, but stimulated with ConA. This components were analyzed by FAB mass, Tandem mass, NMR spectrometry, FT-IR and identified to be phophatidylcholine (1,2-alkyl -sn -glycerol-3-phosphocholine) containing arachidonyl(C20:4), stearoyl(C18:0), oleoyl(C18:1), linoleoyl(C18:2), palmitoyl(C16:0), myristyl(C14:0). Deer antler has been also used for an antitumor activity AK cell. The fraction of 7o% ethanol extracts (CN-E) cant show an antitumor activity to the LAK assay. In view of the central role of Ca^(2+) in driving optimal splenocyte proliferation, we investigated the effects of CE-E-3-C-d-Ⅲ-2 on Ca^(2+)-dependent proliferative responses. As a result [Ca^(2+)], release was shown to depend on the dose of the CE-E-3-C-d-Ⅲ-2.