Candida albicans의, 病原性 關聯 遺傳子의 部分 分離와 鹿茸의 抗眞菌 活性에 대한 硏究

Abstract

Dimorphic fungus Candida albicans is keeping a yeast form as a normal flora in host cell but transformed to a hyphae form when host cell becomes immunocompromised. At the same time, the expression of proteins involved in the pathogenicity are accompanied. This study includes the research about complement receptor(CR2) like receptor which is expressed in the hyphae form and the effects of deer antler to the growth and transition to hyphae form of C albicans. First, CR2 like receptor is expressed in hyphae form but not in yeast form. As a one way to reveal the pathogenic mechanism, the gene for this receptor was partially isolated and sequenced. Previously the CR2 like receptor protein was isolated through the complement-affinity column from the hyphal extract and named p60. Microsequencing of p60 enables to deduce the DNA sequence and from the DNA sequence oligonucleotide (p60 oligomer) was synthesized to use as a probe to detect the gene from the C. albicans genomic library. The 5 clones were isolated and the gene was subcloned and sequenced to identify the open reading frame(ORF). The ORF shows the isolated gene seems to be partial. Further experiment follows the isolation of full gene using the present gene as a probe and characterization of function by making a disrupted cell. Second, by supplementing the 3 fractions of deer antler to the culture of C. albicans, the effect of deer antler to the growth and hyphal transition were studied. Deer antler does not have any effect to the growth of the yeast form but have dramatic effect to the transition and growth of the hyphae form. When deer antler extract were added to the hyphal culture of C. albicans, the growth as hyphae were inhibited and cell grows as a cluster. This phenomema was more serious when insoluble deer antler extract were added. Colony forming unit(CFU) tells the effect of deer antler is the inhibition not killing of fungus.;병원성 이형곰팡이인 Candida albicans는 숙주 세포에서 상주균으로 존재할시 효모형으로 나타나며 숙주의 면역체계가 약화될 경우 균사체형으로의 전환이 일어나며 병원성에 관련되는 단백질 생성이 함께 일어난다. 본 연구에서는 균사체로의 전환시 발현되는 단백질 중 complement receptor2(CR2) like receptor에 대해서, 또 녹용의 균의 생장과 병원성 형태로의 전환에 미치는 영향에 대하여 연구하였다. 첫째, 병원성으로의 전환시 발현되는 CR2 like receptor는 효모형에서는 발현이 안 되나 균사체형에서는 발현되는 것으로, 병원성 기작을 밝히기 위한 일환으로 이 receptor에 관련되는 유전자를 부분 분리하였다. Hyphal extract로부터 receptor와 결합하는 complement의 affinity column을 통해 골라낸 receptor 단백질(p60)의 아미노산 서열을 이용하여 DNA 서열을 추정 합성한 oligonucleotide를 probe로 이용하여 C. albicans genomic library로부터 positive clone을 골라 내었으며 이들로부터 receptor 유전자를 분리한 후 sequencing을 하여 open reading frame(ORF)를 찾았다. 이 연구에서 분리된 유전자는 전체의 일부인 것으로 생각되며 따라서 앞으로는 전체 유전자의 분리와 disruption에 의해 유전자의 기능을 밝히는 연구가 수행되어야 할 것이다. 둘째, Candida albicans의 헝태전환과 생장에 미치는 녹용의 영향을 알아보기 위해 성분분석 중인 녹용의 세가지 성분을 이용하여 그 효과를 알아 보았다. 녹용의 70% ethanol extract(whole extract)를 균사체형 형성 배지에 넣은 경우 균사체형으로의 전환이 억제되며 세포가 stress를 받을 때 나타나는 뭉침현상이 일어나는 것을 관찰할 수 있었으며 whole extract의 성분을 분리한 A fraction과 B fraction을 균사체 형성배지에 넣은 경우 A fraction에서는 균사체 형성이 다소 억제되지만 whole extract를 넣었을 때 보이는 뭉침현상은 일어나지 않았다. 반면 B fraction을 넣은 경우는 균사체형 형성이 억제되며 whole extract에서보다 더 많은 뭉침 현상이 일어나는 것을 확인하였다. 그러므로 지금까지 분석된 성분 중에서 B fraction에 균사체 형성을 억제하는 성분이 포함된 것을 알 수 있다. Colony forming unit(CFU)을 측정한 결과 녹용의 첨가여부에 관계없이 또, 첨가한 녹용의 양에 상관없이 전 colony의 생존이 확인되었다. 이로써 녹용은 균사체로의 전환시 전환과 생장을 억제하나 균을 죽이지는 못하는 것으로 확인되었다.