안점의꽃갯지렁이(Pseudopotamilla occelata)의 난자형성중 수용분자와 G-protein에 의한 난황전구체유입의 조절

Abstract

안점의꽃갯지렁이(Pseudopotamilla occelata)에서 난황단백질 전구체는 난자 형성기간동안 endocytosis에 의하여 난모세포내로 유입된 후 난황립으로 축적된다. 본 연구에서 non-reducing상태로 ligand blotting한 결과 난황전구물질인 체강액단백질(Coelomic fluid protein : CFP)과 결합하는 60KDa과 68KDa의 난모세포막 단백질을 찾을 수 있었다. 난자형성과정중인 직경 70μm이하의 초기, 직경80μm에서 140μm사이의 중기, 직경 180μm이상의 말기 난모세포중에서 중기 난모세포막 단백질에서만 64KDa과 70KDa에 해당하는 ^(125)I-CFP에 대한 수용분자가 관찰되었다. 또한 난모세포를 ^(125)I-CFP와 직접 배양한 결과 ^(125)I-CFP의 유입량은 증기에서 단위 표면적당 55.3ng/㎟으로 가장 높았고, 말기에는 중기에 비해 약 1/5로 감소하였다. 이러한 결과로 보아 CFP는 난모세포막에 존재하는 수용분자를 통하여 endocytosis되며, 수용분자에 의해 난자형성단계에 따라 유입조절이 이루어지는 것을 알 수 있었다. 난모세포에 G-protein에 대한 GTP analogue들을 처리하여 CFP의 수용분자를 매개로 한 endocytosis에 G-protein이 관여하는지 조사하였다. G-protein을 활성화하는 GTP를 처리하고 20시간 동안 배양한 결과 CFP의 유입이 40% 정도 증가하였다. 반면 비가수분해 GTP analogue를 처리하여 배양하였을 경우 CFP유입이 감소하는 것으로 나타났다. 즉 GDP_(β)S를 처리하면 CFP의 유입은 48% 정도 감소하였으며, GTP_(γ)S에 대해서는 56% 감소하여 endocytosis가 저해되었다. 따라서 Pseudopotarmilla occelata난모세포에서 G-protein이 난자형성기간 동안 수용분자를 매개로한 CFP의 endocytosis과정에 관여하고 있다고 생각된다.;In Pseudopotamilla occelata yolk precursor protein is accumulated in yolk granules after being transported into oocytes by endocytosis during oogenesis. Identification of receptors for CFP transport was attempted by ligand blotting of oocytes membrane proteins of three size classes with ^(125)I-CFP, yolk protein precursor, under non-reducing conditions. Proteins of 60KDa and 68KDa, which were isolated from the intermediate size class of 80-140μm in diameter, were identified to be receptors because of their specific binding to ^(125)I-CFP. ^(125)I-CFP was found to be transported most actively into the oocytes of intermediate size class. The observations demonstrate that stage-specific endocytosis of CFP during oogenesis is mediated by the receptor proteins. Effects of analogues of guanine nucleotide on receptor-mediated CFP transport were examined. The rate of CFP transport was increased by addition of GTP presumably by activating G-protein, and inhibited by non-hydrolyzable GTP analogues such as GDP_(β)S and GTP_(γ)S. These results indicate that receptor-mediated CFP endocytosis during oogenesis may be regulated by the involvement of G-protein.