안점의 꽃갯지렁이(Pseudopotamilla occelata)의 난모세포내로 난황전구체 유입을 조절하는 G-protein에 관한 연구

Abstract

안점의꽃갯지렁이(Pseudopotamilla occelata)에서 난황단백질 전구체인 체강단백질(coelomic fluid protein ; CFP)은 난자형성기간동안 수용분자를 매개로한 endocytosis에 의해 난모세포내로 유입되어 난황립을 형성하게 되는데, 이러한 과정에는 guanine nucleotide-binding protein(G-protein)이 CFP의 유입조절에 관여한다. 본 연구에서는 체강단백질의 세포내 유입을 조절하는 G-protein의 계열을 규명하기 위해 G-Protein에 특이적인 cholera toxin(CTX) 및 pertussis toxin(PTX)과 aluminum fluoride(ALF^(-)_(4))를 배양중인 난모세포에 처리한 후 CFP 유입양상을 비교하였고, dibutyryl cyclic AMP(dbcAMP)를 배양중인 난모세포에 처리하여 toxin이 CAMP를 매개로 CFP 유입을 조절하였는지를 확인하였다. Toxin및 ALF^(-)_(4)에 의해 난모세모내로의 CFP유입은 현저히 억제되었으며, PTX를 처리한 난모세포에서도 CFP 유입이 억제되었으나 세포파괴의 현상을 보였다. 난모세포에 dbc AMP를 처리했을때도 CFP유입은 저해되었는데, 이러한 결과는 난모세포내로 CFP의 유입이 heterotrimeric G-protein을 매개로한 cAMP에 의해 저해됨을 말하여준다. 이러한 heterotrimeric G-protein의 존재를 확인하기 위해 G-protein의 α subunit와 결합하는 항체를 난모세포막에 immunoblotting 시킨 결과 중기와 말기 난모세포막에서 41, 45kDa에 해당하는 Giα, Gsα subunit이 확인되었다. 이상의 결과로 종합해 볼 때, Pseudopotamilla occelata에서 난모세포내로의 CFP유입이 난모세포막에 존재하는 heterotrimeric G protein에 의해 조절될 수 있는 가능성을 제시해준다.;Coelomic fluid proteins (CFP), a precusor of yolk proteins is transported b receptor-mediated endocytosis, in which guanine nucleotide-binding protein(G-protein) is involved. To investigate the class and the role of G-protein in the regulation of the transport, we studied the effects of several G-protein specific reagenis on the transport of CFP into the oocytes of the intermediate size class. The transport of CFP was remarkerbly inhibited by ALF^(-)_(4), CTX. PTX showed the inhibitory effects, even though the oocytes were damaged after long incubation. The effects of toxins appear to be mediated by cyclic AMP, since CFP transport was also inhibited by the addition of dibutyryl cAMP. The results strongly suggested that heterotrimeric G-protein involved in CFP transport. These obserbation was confirmed by immunoblotting test using specific antibody(Ab) to Giα, Gsα subunit. The results of immunoblotting test showed clearly a protein of 41kDa, 45kDa which were strongly bound to the Ab, indicating that G protein involved in the transport of CFP into oocytes might be a heterotrimeric G protein, which is probably associated with the plasma membrane of oocytes.