Streptomyces aburabiensis L234가 생산하는 aspergillus flavus에 대한 항진균성 항생물질의 검색 및 분리정제

Abstract

본 연구의 목적은 토양으로부터 항진균성 항생물질을 생산하는 방선균을 분리, 선별하고 그 항생물질을 분리하는데 있다. 다양한 토양시료로부터 Bennett's agar배지를 사용하여 350여주의 방선균을 분리하였으며, 여러가지 진균을 사용하여 항진균성 항생물질 생산 방선균을 선별하였다. 그 결과 Aspergillus속에 대해 항균력을 나타내는 균주가 많았으므로 목재에 생기는 진균인 Aspergillus flavus에 대한 항생물질을 생산하는 방선균중 성장이 우수하고 항균력이 크며 열에 비교적 안정한 항생물질을 생산하는 방선균을 최종선발하였다. 최종선발한 분리주 L234는 그 형태적 특성과 화학동정으로 속동정한 결과 Streptomyces속으로 판명되었고, Taxon program을 이용한 수리동정결과 Streptomyces속의 minor cluster 2에 속하는 Streptomyces aburabiensis의 한 strain으로 동정되었다. 따라서 분리주 L234는 Streptomyces aburabiensis L234로 명명되었다. Streptomyces aburabiensis L234 배양액으로부터 항생물질을 butanol 추출, silica gel 크로마토그래피, Dowex-1(Cl^(-) form) 이온교환수지, 분취용 TLC, 분취용 HPLC등을 사용하여 분리하였다. HPLC profile로 보아 활성분획이 여러개의 peak로 이루어져 있으므로 이후 분리과정을 더 수행해야 할 것이다. 항진균성 항생물질의 최적생산조건을 조사하여 starch와 peptone을 가장 좋은 탄소원과 질소원으로 결정하였고, 최적 농도는 각각 0.5%로 결정하였다. 효모 추출물과 무기인산염을 첨가하면 항생물질 생산이 감소하였다. 따라서 항생물질 생산에 가장 최적한 배지조성은 1% malt extract, 0.5% starch, 0.5% peptone으로 결정되었다.;The aim of the present study was to develop a strain of actinomycetes producing antifungal antibiotics from soil. 345 strains of actinomycetes were isolated from various soil samples and their abilities producing antifungal antibiotics were tested. There were lots of strains producing antibiotics against Aspergillus and a strain of Streptomyces sp. L234 acting against Aspergillus flavus was finally selected. The isolate was identified as a strain of Streptomyces aburabiensis by numerical analysis of the morphological and chemotaxonomical characters using TAXON program. The antifungal antibiotics in culture filtrate was purified by butanol extraction, silica gel chromatography, ion exchange chromatography using Dowex-1 (C1^(-) form), preparative TLC and preparative HPLC using C_(18) column. Optimum culture condition for the production of antibiotics was determined. Starch and peptone were proved to be good carbon and nitrogen source, respectively. The production of antibiotics was reduced when yeast extract and inorganic phosphate were added. The production of antifungal antibiotics was related to mycelium growth.