ECM 단백질에 의한 SK-N-BE(2)세포의 분화유도에 관한 연구

Abstract

BE2 human neuroblastoma was not differentiated by neither NGF nor insulin but differentiated by ECM proteins. When BE2 cells were cultured on the plate coated with collagen/laminin(major component of ECM proteins) for 7 days, neurite outgrowth and increased expression of NSE were observed. This result indicates that BE2 cells can be differentiated to neuronal cells by ECM protein. To address what kind of molecules play a role in signal transduction by ECM, BE2 cells were incubated on collagen/laminin coated plate then the possible signaling molecules were analysed. The tyrosine phosphorylation of total proteins were increased. Moreover, the tyrosine phosphorylation of FAK and proteins which coimmunoprecipitated with FAK were increased in ECM-reacted cells. Activation of ras was studied in the anti-ras immunoprecipitates from both NIH3T3 and BE2 cells incubated on the collagen/laminin coated plate. Many tyrosine phosphorylated components (with MW. 90-150, 100, 45-70,70, 29-35KDa) were present in anti-ras immunoprecipitates from NIH3T3 cells, while few tyrosine phosphorylated proteins were observed in BE2 cells. These results suggest that ras activation was not necessary for ECM mediated cell differentiation and that there could be other signaling mechanisms which can induce the expression of genes needed for neuronal differentiation.;SK-N-BE(2) human neuroblastoma 세포는 NGF나 인슐린 처리시 분화되지 않는다고 알려져 있으나, ECM 단백질에 의해서는 분화가 유도되었는데 신경축색생장과 신경세포 특이단백질인 NSE를 관찰함으로써 확인하였다. ECM 단백질에 의한 신호전달에 어떠한 단백질들이 관여하는가를 알아보기 위하여 ECM의 주성분인 collagen/laminin을 도말한 plate에 BE2 세포를 반응시키고 그 후 일어나는 변화를 fibroblast인 NIH3T3 세포와 비교하였다. BE2 세포를 collagen/laminin에 반응시키면 대조구에 비해 전체단백질의 tyrosine 인산화가 증가하였다. NIH3T3 세포와 BE2 세포에서 모두 ECM 단백질에 의한 신호전달에 관여한다고 알려진 FAK이 존재하였고, collagen/laminin에 반응했을때 FAK과 함께 침전된 단백질의 tyrosine 인산화가 증가하였다. 그러나 ras에 대한 항체로 면역침강하여 tyrosine 인산화가 일어난 단백질을 비교하면 NIH3T3 세포에서는 90-150, 100, 45-70, 70, 29-35KDa부근의 단백질에서 tyrosine 인산화가 증가하였지만 BE2 세포에서는 뚜렷한 변화가 없었다. 이러한 결과는 BE2 세포가 ECM 단백질에 의해서 분화될때 그 초기 신호전달은 FAK, 그리고 FAK과 결합하는 다음 단계 단백질들의 인산화를 통해 일어나지만, ras를 경유하지 않는다는 것을 보여주며 다른 신호전달기작이 존재할 가능성을 시사해준다.