SK-N-BE2 세포주에서 insulin수용체와 결합하는 신호전달 단백질에 관한 연구

Abstract

NGF와 인슐린 처리시 ras관련 신호전달 기작에 이상이 있는 것으로 밝혀진 SK-N-BE(2) human neuroblastoma 세포는 EGF 처리시에도 ras가 활성화되지 않았다. BE(2) 세포에서 NGF, EGF, 인슐린에 의해 ras가 활성화 되지 않은 이유를 밝히기 위해 인슐린 수용체와 결합하는 단백질을 분석하여 인슐린에 의한 신호기작을 PC-12와 비교하였다. BE(2)세포에 인슐린을 처리하였을 때 PC-12와 비교하여 인산화된 양이 다소 적었으나 인슐린 수용체의 자가인산화가 일어났으며 이것으로 인슐린 수용체의 tyrosine kinase는 정상임이 밝혀졌다. 그러나 인산화된 수용체와 결합하는 것으로 알려진 단백질 중 ras 신호전달기작에 관여하는 Grb2,GAP은 인슐린 처리시 인슐린 수용체와 결합하지 않았으며 초기 신호전달이 ras와는 독립된 PLC-γ, PI3-K는 결합하는 것이 확인되었다. 이상의 결과는 BE(2) 세포에서 ras가 활성화되지 않은 원인이 Grb2가 활성화된 인슐린 수용체와 결합하지 못한 것임을 의미하며 수용체 내의 Grb2,GAP 결합부위의 tyrosine 인산화는 수용체의 kinase에 의한 것이라기보다 수용체의 kinase에 의해 활성화되는 non receptor tyrosine kinase에 의해 이루어질 가능성을 나타낸다. BE(2) 세포의 경우 이러한 non receptor tyrosine kinase의 이상으로 ras관련 신호기작이 이루어지지 않음을 예상할 수 있다.;In SK-N-BE(2) human neuroblastoma cells, ras was not activated by peptide growth factors such as NGF, EGF and insulin To address the reason why ras was not activated in BE(2) cells, the proteins associated with insulin receptor in BE(2) cells treated with insulin were compared to those of PC-12 cells which have a normal signaling system to insulin. The insulin receptor of BE(2) cells treated with insulin was phosphorylated on tyrosine residues, although the amount of tyrosine phosphorylation was less than that of PC-12 cells. This result indicates that insulin receptor tyrosine kinase of BE(2) cells is normal. However, Grb2 and GAP that involved in ras signaling pathway didn't exist in the anti-insulin receptor immunoprecipitates from the BE(2) cells treated with insulin, while PLC-γ and PI3-K(p85) were found. These results suggest that insulin doesn't activate ras in BE(2) cells because Grb2 can not bind insulin receptor. This inability of ras activation was due to a missing or malfunctioning component in BE(2) cells, likely non receptor tyrosine kinase, which possibly can phosphorylate Grb2 and GAP binding sites within insulin receptor.