Dystrophin 단백질의 항체 생성에 관한 연구

Abstract

Dystrophin은 유전적 질환인 Duchenne muscular dystrophy (DMD)에서 결손되는 유전적 생성물이다. Dystrophin은 계통발생적으로 매우 잘 보존된 단백질로 전기가오리의 전기기관의 막에 다량 존재한다. 본 실험에서는 전기가오리 전기기관 막의 dystrophin에 대한 항체를 생성하는 세포(hybridoma)를 얻고자 하였다. 400KDa의 큰 분자량을 지닌 dystrophin은 acetylcholine 수용체가 풍부히 존재하는 전기가오리 막을 제조하고 알칼리로 추출한 후 전기영동하여 분리하였다. 분리된 dystrophin을 항원으로 사용하여 Balb/C mouse에 면역하였고, 3회의 면역 후 강한 항체 생성 능력을 보인 생쥐의 비장 세포와 B-세포 암세포인 653 myeloma세포를 융합하였다. 융합된 hybridoma는 hypoxanthin-aminopterin-thymidin (HAT) 배지에서 배양하면서 선별하였고 hybridoma가 자라고있는 몇 개의 well은 전기가오리의 dystrophin에 대한 항체를 생성한다는 것이 면역 화학 반응을 통해 확인되었다. 또한, 전기가오리의 dystrophin은 사람 근육의 dystrophin과 교차반응한다는 것도 알 수 있었다.;Dystrophin is the gene product that is deficient in Duchenne muscular dystrophy (DMD). Dystrophin appears to be phylogenetically very well conserved protein and is abundant in the membrane of Torpedo electric organ. Our goal is to produce antibodies against Torpedo dystrophin. The 400KDa dystrophin was isolated from the SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) of the alkaline extract of the purified acetylcholine receptor-rich Torpedo membrane and used as antigen for immunizations of Balb/C mice. Since the mouse showed strong antibody reactions after the third immunization,spleen cells of the mouse were fused with 653 mice myelomas. Hybridomas were selected by culturing them in the HAT (hypoxanthin, aminopterin, thymidin) medium. Immunoblot analysis have shown that a few wells of growing hybridomas produced antibodies against Torpedo dystrophin which crossreacted with human muscle dystrophin. We are in the process of subcloning these cell lines to produce monoclonal antibodies.