Full metadata record
DC Field | Value | Language |
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dc.contributor.advisor | 배무 | - |
dc.contributor.author | 姜秀庚 | - |
dc.creator | 姜秀庚 | - |
dc.date.accessioned | 2016-08-26T10:08:27Z | - |
dc.date.available | 2016-08-26T10:08:27Z | - |
dc.date.issued | 1990 | - |
dc.identifier.other | OAK-000000017110 | - |
dc.identifier.uri | https://dspace.ewha.ac.kr/handle/2015.oak/197344 | - |
dc.identifier.uri | http://dcollection.ewha.ac.kr/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000017110 | - |
dc.description.abstract | Alkaline α-amylase expressed in the transformant Bacillus subtilis containing alkaline amylase gene from the alkalophilic Bacillus sp.MB809 was purified through several separation processes. The molecular weight of the α-amylase is approximately 59,000 daltons on SDS-PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis) and Sephadex G-100 gel filtration. Amino acid sequencing of terminal portion was done with eluted amylase fraction from the SDS-PAGE gel. NH_(2)-Terminal portion amino acid sequence of α-amyalse determined by the Edman degradation method and HPLC isocratic solvent elution resulted in NH_(2)-Ser-Thr- Ala-Pro-Ser-(Ile)-Lys-Ala-Gly-Thr-(Ile)-Leu-. COOH- Terminal portion amino acid sequence was determined by digestion of the α-amylase with gradient solvent elution resulted in -Thr-Trp-Pro-Lys-COOH. The chemical modification study on the α-amylase revealed that Histidine, Tyrosine and Tryptophane are active site component amino acids. In connection with these results, proteolytic modification of α-amylase COOH-Terminal portion has been practiced. The COOH-terminal portion deleted α-amylase exhibited a maximum stability and activity at pH 7 environment, which indicate that the COOH-terminal portion has very important roles in alkalophilicity mechanism of alkaline α-amylase from Bacillus sp MB809. | - |
dc.description.tableofcontents | 목차 = ⅲ ABSTRACT = ⅸ 서론 = 1 실험재료 및 방법 = 5 A. 재료 및 사용 기기 = 5 B. α-Amylase의 분리 및 정제 = 6 1. 균주 및 배양 조건 = 6 2. 조효소 용액의 조제 = 6 3. 단백질 정량 및 활성도 측정 = 6 4. 아세톤에 의한 침전 = 7 5. Chromatography 법에 의한 분리. 정제 = 7 1) DEAE-cellulose column chromatography = 7 2) Sephadex G-100 colunm chromatography = 7 3) Sephadex G-75 column chromatography = 9 6. SDS-PAGE에 의한 순수도 검정 및 분자량 측정 = 9 7. SDS-PAGE로 부터의 효소 용출 = 9 C. N,C 말단 부위의 부분적 아미노산 서열 결정 = 10 1. N 말단 부위의 부분적 아미노산 서열 결정 = 10 1) PTH-Amino acid 표준 곡선 = 10 2) Manual Edman degradation 방법에 의한 PTH-A.A의 형성 = 11 3) HPLC isocratic elution에 의한 detection = 11 2. C-말단 부위의 부분적 서열 결정 = 13 1) PTC-A.A 표준 곡선 = 13 2) Carboxypeptidase A. B를 이용한 C-말단 부위의 아미노산의 분해 = 14 3) PTC-A.A 유도체 형성 및 HPLC에 의한 detection = 14 C. 효소의 화학 변형 = 14 1. Urea와 SDS에 의한 저해 효과 = 14 2. Sulfhydryl group 화합물에 의한 화학 변형 = 16 3. 활성 부위 아미노산 잔기의 화학 변형 = 16 1) Hydroxylamine의 deacylation 효과 = 16 2) spectral study = 18 3) 활성 부위의 화학변형에 대한 기질 보호효과 = 18 D. C-말단 부위 deletion에 의한 pH 안정성 = 18 1. C-말단 부위의 부분적 deletion = 19 2. C-말단 부위 결손 효소의 분리 = 19 3. C-말단 부위 결손 효소의 pH 안정성 및 활성도 = 19 실험 결과 및 고찰 = 22 A. 효소의 정제 = 22 1. Acetone에 의한 침전 = 22 2. DEAE-Cellulose column chromatography = 22 3. Sephadex G-100 column chromatography = 22 4. Sephadex G-75 column chromatography = 24 5. 정제 효소의 순수도 및 분자량 측정 = 24 6. SDS-PAGE 용출 = 29 B. N,C 말단 부위의 아미노산 서열 결정 = 29 1. N 말단 부위의 서열 결정 = 29 1) PTH-A.A 표준 용출 시간 = 29 2) HPLC 용출 곡선에 의한 서열 결정 및 상동성 = 31 2. C-말단 부위의 서열 결정 = 35 1) PTC-A.A의 표준 곡선 = 35 2) HPLC 용출 곡선에 의한 서열 결정 = 35 C. 효소의 화학 변형 = 35 1. SDS와 Urea에 의한 활성 저해 효과 = 35 2. Disulfide bond에 의한 화학 변형 = 39 3. 활성 부위의 화학 변형 = 43 1) Hydroxylamine 효과와 Spectral study = 45 2) 기질 보호 효과 = 45 D. C-말단 부위 결손 효소의 pH 안정성 = 45 1. Sephadex G-25 column chromatography에 의한 분리 = 45 2. pH 안정성 및 활성도 = 49 결론 = 52 적요 = 54 참고문헌 = 55 감사의 글 = 55 | - |
dc.format | application/pdf | - |
dc.format.extent | 2077066 bytes | - |
dc.language | kor | - |
dc.publisher | 이화여자대학교 대학원 | - |
dc.subject | Bacillus | - |
dc.subject | 알카리성 | - |
dc.subject | α-amylase | - |
dc.subject | 알칼리 | - |
dc.subject | 알카리 | - |
dc.subject | MB809 | - |
dc.title | Bacillus sp. MB809에서의 알카리성 α-amylase의 말단부위 서열조사 및 알카리 특성에 관한 연구 | - |
dc.type | Master's Thesis | - |
dc.format.page | 74 p. | - |
dc.identifier.thesisdegree | Master | - |
dc.identifier.major | 대학원 생물학과 | - |
dc.date.awarded | 1990. 8 | - |