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녹용 성분 중 Acetylcholinesterase 저해제의 정제 및 구조 분석

Title
녹용 성분 중 Acetylcholinesterase 저해제의 정제 및 구조 분석
Authors
이희형
Issue Date
2000
Department/Major
대학원 분자생명과학부
Publisher
이화여자대학교 대학원
Degree
Master
Abstract
녹용 추출물이 항노화 작용을 하며 고령의 쥐에서 기억능, 학습능을 중진시킨다는 연구보고 및 치매와 관련되어 신경이나 효소에 관계가 있을 것이라는 기존의 연구에 기초하여 녹용 추출물의 생리활성을 검색하였다. 본 연구에서는 녹용성분 중 acetylcholinesterase를 저해시키는 물질을 정제, 구조분석하였으며 acetylcholinesterase의 저해도를 측정하였다. 녹용 성분 분리는 다단계 용매 추출법을 사용해 hexane, chloroform 및 70% ethanol으로 추출하였다. 녹용의 chloroform 추출물이 쥐로부터 분리한 acetylcholinesterase의 활성을 크게 저해시켰으므로 추출물을 silica gel column chromatography로 정제하면서 단계별로 정제도를 확인하였다. 동시에 acetylcholinesterase 저해 효과를 측정하였는데 최종 정제 물질은 70%의 저해도를 나타내었다. 이것을 NMR spectroscopy, IR spectroscophy, Tandem-MS, GC-MS를 사용하여 구조분석 한 결과 분자량이 122.1인 nicotinamide임을 확인했다. 분석된 물질인 nicotinamide는 60%의 acetylcholinesterase 저해 효과를 나타냈다. Acetylcholinesterase 저해 효과와 butylcholinesterase 저해 효과의 선택성 실험에서는 acetylcholinesterase 저해 효과가 1.6배 이상 선택적임이 확인되었다. 효소의 반응속도를 실험한 결과 nicotinamide는 경쟁적 저해반응을 나타냄을 알 수 있었다. 또한 녹용의 Hexane층에서 콜레스테롤을 분리, 정제하였다. silica gel column chromatography, HPTLC를 이용하여 정제하였고 구조는 IR spectroscopy, GC-MS와 NMR spectroscopy를 사용하여 분석하였다. ; In previous report, deer Antler(Cervus nippon) was shown to have anti-aging effect. In this study, the biological activity of deer antler components was studied on the basis of previous results. Cervus nippon was extracted with hexane, chloroform, 70% ethanol. we demonstrated that chloroform extract of deer antler was the most active fraction for the acetylcholinesterase inhibition. Chloroform extracts were purified by silica gel column chromatography and high performance thin layer chromatography. The effective components was identified as CN-C-6- Ms-F-d-I. It was analyzed by fast atom bombardment, gas chromatography mass spectrometry, Infrared mass spectrometry and magnetic resonance spectroscopy. The structure of CN-C-6-Ms-F-d-I is a nicotinamide. The acetylcholmesterase activities were investigated in each fraction of purification steps. The activities were measured with Ellman s method by UV spectrometry. Chloroform extracts was showed about 70% significant inhibitory effects and nicotmeamide showed about 60% significant inhibitory effects on the acetylchohnesterase activity. The nicotinamide was reacted more selectivity with acetylcholinesterase than butylcholinesterase and it was a competitive inhibitor. Purified CN-H-4-B-c obtained from hexane extraxts was identified by fast atom bombardment , gas chromatography mass spectrometry, Infrared mass spectrometry and one dimensional magnetic resonance spectroscopy.
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일반대학원 > 생명·약학부 > Theses_Master
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