영지에서 Acetylcholinesterase 저해제 정제 및 구조 분석

Abstract

영지(Ganoderma lucidum)는 불로초로 알려져 있으며 아시아에서 중요한 전통적인 약재중의 하나로 사용되어 왔다. 영지에서 기존에 밝혀진 성분으로는 항암 효과가 있는 polysaccharide, 에이즈 바이러스 억제효과가 있는 triterpene 계열의 ganoderic acid 유도체, 면역조절작용이 있는 단백질 Lin-Zhi, hyperglycemic 효과가 있는 glycan 계열의 ganoderanB, C 그리 고 항염증작용이 있는 water추출물등이 있다. 본 연구에서 영지를 계통적으로 분리, 분석하였으며 acetylcholinesterase(AChE)저해효과를 나타내는 분획을 따라가면서 성분을 구조 분석하였다. 영지에 존재하는 성분들을 용매 추출법에 의해 핵산, 클로로포름, 메탄올, 70% 에탄올층으로 분획하고 이 분획 중에서 효과가 가장 좋은 메탄올충을 선택하여 여러 단계에 걸친 silica gel column chromatography로 분리 정제하여 IR, FAB-MS, Tandem-MS, NMR spectroscopy로 분석하였다. 정제되어가는 과정에서 각 분획에 대하여 ICR mouse 뇌조직에서 분리한 AChE 의 저해도를 측정하기 위하여 UV- spectroscopy를 이용한 초기반응속도를 구하였다. 56%의 AChE 저해 효과가 있는 활생성분을 구조 분석한 결과 oleamide 이었다. in vitro assay 를 통해서 oleamide 의 AChE 활성저해도를 측정한 결과 70%의 AChE활성저해 효과를 확인할 수 있었다. Butyrylcholinesterase(BuChE) 와 AChE 간의 선택성을 측정한 결과 Oleamide는 AChE 만을 선택적으로 저해하였다. Kinetic assay를 통하여 AChE 활성저해에 대한 oleamide의 작용기전을 측정한 결과 non-competitive inhibitor로 예측하였다. ; Ganoderma lucidum has been used as one of the most important herbal drugs in Asia. It has shown excellent pharmacological activities such as anti-inflammatory, anti-tumor, immune modulating activities, and anti-HIV protease Causes of the Alzheimer s disease was reported acetylcholine depletion, amyloid β protein aggregation, oxidative stress, neuronal cell death by apoptosis. The known Ganoderma lucidum s property of the antiinflammatory effects has led us to study on the acetylcholinesterase inhibitory activity of Ganoderma lucidum in vitro. We purified a new acetylcholinesterase inhibitor from methanol extract of Ganoderma lucidum with silica gel column chromatography. We determined the structure of the isolated compound by spectroscopic methods using ¹H-NMR, ^13 C-NMR, FAB-MS, Tandem-MS, and FT-IR spectroscopy. Purifed compound frorm Ganoderma lucidum was identified with oleamide. Acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase inhibition for oleamide were measured by a colourimetric method. The result demonstrated that oleamide was selective acetylcholinesterase inhibitor. A Lineswieber-Buck plot for oleamide indicated a pattern of inhibition of acetylcholinesterase of the non-competitive type, as the line intersecting in the left horizontal.