생쥐에서 과배란유도시 인간융모성선자극 홀몬 투여방법이 체외수정 및 배자의 체외성장에 미치는 영향에 관한 연구

Abstract

This study was carried out to investigate the effect of the timing and dose of human chorionic gonadotropin(hCG) on oocyte recovery, in vitro fertilization, and preimplantation development in superovulation of mouse. F1 hydrid(C57BL x CBA) mice were obtained and superovulation was induced in female mice by sequential intraperitoneal injection of PMSG and hCG. In the first series of experiments, mice received 5 IU of PMSG given intraperitoneally, and 48 hours later wre injected 1 IU, 5 IU or 10 IU of hCG respectively. In the second series of experiemnts, mice received 5 IU of PMSG given intraperitoneally and were injected 5 IU of hCG 36, 48 or 60 hours later respectively. 1. When the mice received 5 IU of PMSG given intraperitoneally and 48 hours later were injected 1 IU, 5 IU or 10 IU of hCG respectively, there were no differences in the total number of the oocytes obtained from the three experimental groups. When the cultures were examined 48 hour after the termination of insemination the proportion of unfragmented oocytes which had developed over two-cell stage was observed to be lowest in 10 IU hCG group. When the cultures were examined 120 hour after termination of insemination the proportion of embryos which had developed to the blastocyst stage was observed to be significantly higher in 10 IU hCG group than 5 IU hCG group (P<0.05), but there was no difference between 10 IU hCG group and 1 IU hCG group. 2. When the mice received 5 IU of PMSG and were injected 5 IU of hCG 36, 48 or 60 hours later respectively, there were no differences in the total number of oocytes obtained from the three experimental groups. When cultures were examined 48 hour after the termination of insemination the proportion of unfragmented oocytes which had developed over two-cell stage was observed to be significantly lower in 36 hour interval group than 48 hour interval and 60 hour interval group(P<0.05). When the cultures were examined 120 hour after termination of insemination the proportion of embryos which had developed to the blastocyst stage was found to be higher in 60 hour interval group than 36 interval or 48 hour interval group(P<0.05), and the proportion of hatching blastocyst was found to be higher in 60 hour interval group as well. In this study, it was concluded that the administration of adequate dose of hCG, and long(60 hour) PMSG-hCG interval were necessary in superovulation of mice(C57BL x CBA) in order to get a large number of oocytes which had an early oocytes which had an early embryonic developmental capability when fertilized in vitro, and especially it had better have been avoided to administer a large dose of hCG. ; 난자의 체외수정 및 배아의 자궁내 이식을 시술하는 경우 수정 가능한 성숙한 난자를 다수 얻기 위해서 과배란유도를 시행하게 된다. 과배란유도의 방법은 다양하지만 어떤 방법이나 공통적으로 마무리 과정은 hCG의 투여로 최종성숙을 유도하는 것이다. 체외수정시술에서 성패의 중요한 인자의 하나인 난자의 질과 체외수정된 배자의 생종력은 과배란유도주기에서 hCG투여까지의 기간의 장단과 투여용량에 따라 많은 영향을 받는 것으로 알려져 있으나, 과배란 유도과정에서 hCG의 투여시기 및 용량이 난자의 획득, 체외수정 및 배자의 체외성장에 미치는 영향에 대한 보고가 다양하다. 저자는 생쥐(C57BL x CBA)를 이용하여 과배란유도과정에서 hCG 투여시기 및 용량이 난자의 획득, 체외 수정 및 배자의 체외성장에 미치는 영향에 대해 종합적으로 관찰, 비교 분석하기 위하여 6-8주령의 암컷 생쥐에 발정주기에 상관없이 PMSG 5IU를 복강내 주사하고 48시간 후에 세 군에 각각 1 IU, 5 IU 및 10 IU의 hCG를 투여하여 투여용량의 효과를 관찰하고, PMSG를 투여하고 36시간 후, 48시간 후, 60시간 후에 5 IU의 hCG를 세 군에 각각 투여하여 hCG 투여시각에 따른 효과를 관찰하여 비교 분석하였다. 1. PMSG의 투여용량을 일정하게 하고(5 IU) 48시간 후에 1 IU, 5 IU, 10 IU의 hCG를 세 군의 생쥐에 각각 투여하여 난자를 획득한 결과 각각의 투여군 간에 획득된 난자의 총수에는 유의한 차이가 없었으나 정자주입 48시간 후에 정상적으로 2세포기 이상 분열한 배자의 비율은 hCG투여용량이 증가할수록 낮아서 10 IU의 hCG를 투여한 군에서 가장 낮았으며 비정상 난자의 비율은 가장 높았다. 정자주입 120시간 후 포배기에 도달한 배자의 비율은 10 IU의 hCG 투여군에서 5 IU의 hCG 투여군에 비해 유의하게 높았고, 1 IU의 투여군과 5 IU 투여군 사이에는 유의한 차이가 없었다. 2. PMSG와 hCG 투여용량이 일정할 때 PMSG-hCG 시간간격의 변화에 따른 획득 난자 총수의 차이는 관찰되지 않았고, PMSG-hCG 시간간격이 48시간 및 60시간일 때 36시간인 경우보다 2세포기 이상 성장한 배자의 비율이 유의하게 높았으며, 포배기 및 부화포배기에 도달한 배자의 비율은 PMSG-hCG 시간간격이 60시간일 때 36시간 및 48시간인 경우에 비해서 유의하게 높았다. 본 연구의 결과를 종합하여 볼 때 생쥐(C57BL x CBA)의 체외수정을 위한 PMSG-hCG 과배란유도시 체외수정 및 체외성장이 가능한 정상적인 난자를 많이 획득하기 위해서는 과용량의 hCG 투여는 가급적 피하는 것이 바람직하다고 생각되며, hCG 투여 시각에 있어서는 PMSG 투여 36시간 후에 투여하면 체외수정 및 체외 성장이 가능한 정상적인 난자의 획득율이 낮아지므로 48시간 내지 60시간 후에 투여하는 것이 적절하며 포배기와 부화 포배기 까지의 배자의 체외성장은 60시간 후에 투여하는 것이 더욱 좋은 성적을 얻을 수 있다고 생각된다. 이상의 결과로 미루어 보아 사람의 체외수정시술에 있어서도 과배란 유도시 hCG 투여용량은 과용량이나 저용량이 되지 않도록 해야하며, 특히 과용량의 hCG 사용은 가급적 피하는 것이 바람직하며, hCG 투여시기는 적어도 coasting period를 지난 후 투여하는 것이 바람직할 것으로 추정된다.