폐렴사슬알균 특이 IgG 항체의 정량적 측정을 위한 효소면역측정법의 타당성 연구

Abstract

폐렴사슬알균 백신의 면역원성 평가에 사용되는 항 폐렴사슬알균 다당질 IgG 항체의 정량적 측정을 위해 표준화된 ELISA 방법이 전 세계적으로 사용되고 있다. 본 연구는 이화백신효능연구센터에서 수행되는 ELISA에 의한 항 폐렴사슬알균 다당질 IgG 항체 검사의 타당성을 입증하기 위해 시행되었다. 7가 폐렴사슬알균 단백결합백신에 포함되어 있는 7가지 혈청형(4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F)에 대한 항 폐렴사슬알균 다당질 IgG 항체를 정량적으로 측정하기 위한 방법인 표준화된 ELISA를 시행하여 타당성 입증을 위한 검사로 특이성, 정밀성(반복성, 실험실 내 정밀성), 정확성, 첨가회복검사, 최소정량한계 및 안정성(냉·해동 안정성, 단기온도안정성)를 평가하였다. 5개의 보정 혈청은 7개 혈청형의 특이 다당질 항원에 대해 모두 specific 하였으며, 정밀성의 재현성과 실험실 내 정밀성은 전반적으로 모든 혈청형에서 허용기준(재현성: CV ≤ 15%, 실험실 내 정밀성: CV ≤ 20%)을 만족하였다. 정확성은 보정 혈청의 임시 지정된 항체가와 본 검사실에서의 항체가를 비교한 결과 모든 혈청형에서 94% 이상의 높은 상관관계를 보였다. 첨가회복검사는 허용기준을 대부분 만족하였다. 최소정량한계는 각 혈청형에 대해 lower limit of quantitation (LLOQ)을 구하여 정량 한계를 확인한 결과 0.05~0.093 μg/mL으로 나타났다. 안정성을 위한 냉·해동 안정성의 1~4회 녹인 회수와, 단기온도안정성의 혈청을 실온에서 2~4회 방치하였을 때는 상대량에 비해 83.61~115.59%와 81.3~120.0%로 각각 허용기준(± 20% 이내)을 만족하였다. 본 결과로 이화백신효능연구센터에서 수행되는 ELISA에 의한 7개 폐렴사슬알균 특이 다당질 항원에 대한 IgG 항체 검사의 타당성을 입증할 수 있었다.;ELISA is a standardized method to quantify IgG antibodies specific to pneumococcal capsular polysaccharide to evaluate the efficacy of Streptococcus pneumoniae vaccine. The aim of the present study was to assess the validity of specific anti-pneumococcal capsular polysaccharide IgG antibodies by ELISA performed at the Center for Vaccine Evaluation and Study, Ewha Medical Research Institute. We evaluated specificity, precision (reproducibility, intermediate precision), accuracy, spiking recovery test, lower limit of quantification (LLOQ), and stability (freeze thaw stability, short term temperature stability) to assess the validity of ELISA for seven serotypes (4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F and 23F) which are included in the 7 valent pneumococcal protein conjugate vaccine. According to the results, ELISA was proven for the specific and reproducibility and intermediate precision were generally within acceptance criteria (reproducibility: CV ≤ 15%, intermediate precision: CV ≤ 20%) for all seven serotypes. Comparison between provisional assignments of calibration sera and the ELISA examined in this laboratory showed a high correlation over 94% for all the seven serotypes, supporting accuracy of the ELISA. Spiking recovery test also fell within acceptance criteria. Quantification limit, calculated by the lower limit of quantitation (LLOQ) for each serotypes was from 0.05 to 0.093 ㎍/mL. For the freeze thaw stability after 1 to 4 freeze and thaw cycles and the short term temperature stability evaluated by thawing 2 to 4 times at room temperature were within ± 20% of acceptance criteria compared the rate of relativity from 83.61 to 115.59%, from 81.3 to 120.0%, respectively. Based on the results, the validity for the evaluation of seven Streptococcus pneumoniae specific anti-pneumococcal capsular polysaccharide IgG antibodies by ELISA, which was conducted at the Center for Vaccine Evaluation and Study, Ewha Medical Research Institute was confirmed.