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공배양이 생쥐 2-세포기 배아의 발생에 미치는 영향에 관한 연구
- Title
- 공배양이 생쥐 2-세포기 배아의 발생에 미치는 영향에 관한 연구
- Other Titles
- (The) Effect of coculture on development of 2-cell stage mouse embryos
- Authors
- 朴春園
- Issue Date
- 1998
- Department/Major
- 대학원 의학과
- Keywords
- 공배양; 생쥐; 2-세포기; 배아
- Publisher
- 이화여자대학교 대학원
- Degree
- Master
- Abstract
- 최근 체외수정 프로그램의 커다란 발전과 함께 임신을 증가시키기 위한 여러 노력이 시도되고 있으나 아직도 출산 성공율은 낮다. 이러한 체외수정 프로그램의 낮은 성공율은 여러 가지로 설명될 수 있겠으나 이중에서도 배아 이식시 이식하는 배아와 자궁내막과의 이질성이 가장 큰 한계점으로 지적되고 있다. 따라서 체외 수정 프로그램에 있어서 공배양을 이용하여 체외에서 배아 발달을 증진시키려는 노력이 시도되고 있으며 공배양은 체외 환경을 생체 내 조건과 유사하게 개선시킴으로써 배아발달에 유익한 효과를 나타낸다. 이에 다양한 공배양 방법이 고안되어 배아의 질을 향상시키고, 배아를 자궁이식전에 좀 더 오랫동안 체외에서 발생시켜 임신률을 증가시킨다는 보고가 있다.
본 연구는 생쥐 2-세포기 배아를 Ham's F-10과 m-KRB 배양액내에서 Vero 세포와 인간의 양막 세포와 각각 공배양함으로써 배아의 발생과정을 관찰하고, 이를 공배양하지 않은 대조군과 비교분석하여 배아의 발생에 미치는 공배양의 효과를 알아보고자 한다.
1. 단순 배양액 (m-KRB) 에서의 2-세포기 생쥐 배아의 공배양
대조군 및 Vero 세포, 양막 세포로 공배양한 군에서 2-세포기 배아 각각 57,52,53 개가 포배기로의 발달은 대조군 98%, Vero 세포로 공배양한 군 94%, 양막 세포로 공배양한 군 55%였다. 부화를 일으킨 배아는 대조군 72%, Vero 세포로 공배양한 군 71%, 양막 세포로 공배양한 군 36% 였다. 2-세포기 배아로부터 포배기로의 발달 및 부화배반포로의 부화율은 대조군 및 Vero 세포 공배양군과 양막 세포 공배양군을 비교할 때 양막 세포 공배양군에서 유의하게 낮았다(P<0.01).
2. 복합 배양액 (Ham' F-10) 에서의 2-세포기 생쥐 배아의 공배양
대조군 및 Vero 세포, 양막 세포를 공배양한 군의 2-세포기 배아 각각 66, 64, 64 개에서 포배기로의 발달은 대조군 89%, Vero 세포로 공배양한 군 92%, 양막 세포로 공배양한 군 95% 였다. 부화를 일으킨 배아는 대조군 55%, Vero 세포로 공배양한 군 67%, 양막 세포로 공배양한 군 68% 였다. 2-세포기 배아로부터 포배기로의 발달 및 부화율은 세 군간에 유의한 차이가 없었다.
3. 복합 배양액 (Ham's F-10) 에서의 포배기 배아의 세포 수 비교
포배기 배아 당 총 세포수의 평균치는 대조군 69.22±20.42 개, Vero 세포로 공배양한 군 119.88±25.19 개, 양막 세포로 공배양한 군 116±16.02 개로 공배양군이 공배양을 실시하지않은 대조군에 비해 유의하게 세포수가 많았다(P<0.05).
이상의 결과로 미루어 보아 공배양이 배아의 시기적 성장발달은 촉진시키지 않지만 공배양된 배아의 질은 향상시킨다고 생각된다. 따라서 체외수정 프로그램시 공배양을 이용하면 좋은 결과를 가져올 것으로 생각된다.;Embryos of most mammalian spieces grown in vitro would undergo developmental arrest at the approximate time of genomic activation. As a result, embryos are usually transferred to the uterus at the 4- to 8-cell stage to avoid the loss of viability. Early transfer has led to asynchrony of the endometrium-trophectoderm interaction between the embryo and uterine environment. A culture system which could prolong culture time and increase embryonic cleavage rate and viability would improve the success rate. Using Vero cells, an in vitro co-culture system was developed to investigate and promote human embryo development. In this experiment, we have cocultured mouse embryos with Vero cells and with amniocytes in different medium. In m-KRB, 56 of the 57 (98%) embryos reached the blastocyst stage. 49 of the 52 (94%) embryos cocultured with Vero cells reached the blastocyst stage and 29 of the 53 (55%) embryos cocultured with amniocytes reached the blastocyst stage(P<0.0l). The hatching rate of embryos cocultured with Vero cells (71%) was significantly increased compared with that of embryos cocultured with amniocytes (36%). In Ham's F-10, the development rate of 2-cell stage mouse embryos showed no significant differences in three groups(control 89%; Vero cells 92%; amniocytes 95%). And also the cell number of expanded blastocyst in experimental groups was significantly greater as compared with that of the control group(P<0.0l).
So, therefore coculture system improve the quality of mouse embryos and might increase the implantation and pregnancy rate.
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