가와사키병 환아에서 Annealing Control Primer System 을 이용한 Differentially Expressed Gene의 발현에 대한 연구

Abstract

가와사키병은 소아에서 흔한 급성 전신성 혈관염이다. 원인은 아직 구체적으로 알려져 있지 않으나 역학적인 연구에 의하면 유전적인 소인이 가와사키병의 병태생리와 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 가와사키병의 단계에 따른 differentially expressed gene(DEG)의 발현을 검사하기 위해 시행하였다. 급성기, 아급성기, 회복기의 질병 단계에 있는 가와사키병 환아와 정상 소아에서 혈액을 채취하여 RNA를 추출한 후 first-strand cDNA를 합성하였다. Annealing control primer(ACP)를 이용한 GeneFishing PCR 방법으로 유전자의 발현을 증폭시켰다. PCR 생산물을 2% 아가로즈 젤에 전기 영동하여 DEG를 찾은 후 이중 10개의 밴드를 선택하여 염기서열을 분석하였다. 120개의 임의의 ACP를 이용하여 165개의 DEG를 검출하였다. 이중 면역글로불린 κ, λ 유전자(DEG 20, 45, 54)는 정상 대조군에 비해 회복기에 발현이 증가하였고 apollon 유전자(DEG 64)는 정상 대조군에 비해 가와사키군의 전체 단계에서 유전자 발현이 감소하였다. 또한 TNIK (Traf2- and Nck-interacting kinase) 유전자 등 발현이 다양한 여러 유전자를 검출하였다. 이러한 결과는 가와사키병의 경과에 따라 유전적 변화가 있을 수 있음을 시사한다. 가와사키병의 원인과 병태생리를 알아내기 위해 앞으로 DEG에 대한 더 많은 기능적 연구가 필요하다.;Kawasaki disease is an acute systemic vasculitis syndrome of children. Although its etiology is largely unknown, epidemiological findings suggest that genetic factors play a role in the pathogenesis of Kawasaki disease. Differentially expressed genes were investigated in Kawasaki patients. Bloods were extracted from Kawasaki patients in acute, subacute, convalescent phase and normal control group. Gene expressions were investigated by annealing control primer based GeneFishing PCR. Products were visualized after electrophoresis on 2% agarose gel and automatically sequenced. One hundred sixty-five differentially expressed genes were identified by using 120 ACPs. Expression of immunoglobulin κ and λ (DEG 20, 45, 54) was relatively up-regulated in convalescent phase of Kawasaki disease. Expression of apollon gene (DEG 64) was relatively down-regulated in all phase of Kawasaki disease. TNIK gene and other DEGs were also found. This findings suggest that different genetic change occur in the course of Kawasaki disease. Further study of differentially expressed genes using may provide etiology and pathogenesis of Kawasaki disease.