p16^(ink4a) as an Adjunct Test for Cervical Neoplasia in Patients with Abnormal Liquid-Based Cytology(ThinPrep^(??))

Abstract

Recently, High-risk HPV-DNA testing is considered as a very good adjunct test for the diagnosis of cervical neoplasia. But the HPV-DNA testing is expensive and not easily available in test in all clinical place, especially in developing countries. Thus we investigated the role of p16^(ink4a) immunostaining as another adjunct test for diagnosis of cervical neoplasia in patients with abnormal liquid-based cytology. A total of 87 cases(Normal: 3 cases, ASCUS: 24 cases, LSIL: 30 cases, HSIL: 30 cases) were entered into this study. We performed p16^(ink4a) immunostaining on ThinPrep^(??) slides and also in the cervical tissue biopsies of the same patients. Then we compared the results of p16^(ink4a) immunostaining of ThinPrep^(??) slides with those of the cervical tissue biopsies. In addition, high-risk HPV-DNA was detected using Hybrid Capture Assay System II. The p16^(ink4a) protein was expressed positively on ThinPrep^(??) slides in 0.0%, 66.7%, 70.0%, and 96.7% of normal, ASCUS, LSIL and HSIL group, respectively. And the p16^(ink4a) protein was expressed in cervical tissue biopsies in 0.0%, 37.2%, 75.0%, 97.1%, and 100% of normal, CIN I, CIN II, CIN III and squamous cell carcinoma group, respectively. Immunoreactivity of p16^(ink4a) showed positive correlation with the grades of cervical neoplasia. The concordance rate between the immunoreactivity of p16^(ink4a) and diagnosis was higher in high grade lesions(HSIL in ThinPrep^(??) and CIN II/III/SCC in tissue biopsy) than in low grade lesions(ASCUS/LSIL in ThinPrep^(??) and squamous metaplasia/CIN I in biopsy). In this study we compared the diagnostic accuracy of HPV-DNA test and p16^(ink4a) immunostaining for cervical neoplasia in low grade lesion. The positive predictive value(PPV) of p16^(ink4a) for diagnosis of high grade lesion was 62.1% (23/37). The sensitivity, specificity and negative predictive value of p16^(ink4a) was 60.5%, 12.5% and 11.8%, respectively. The PPV of HC2 for a diagnosis of high grade lesion was 71.8% (28/39), the sensitivity, specificity and negative predictive value of HC2 was 73.7%, 31.3% and 33.3%, respectively. By the McNemar's test, no difference in diagnostic accuracy between p16^(ink4a) immunostaining test and HC2 testing was noted. According to the above results, p16^(ink4a) immunostaining might be used as an adjunct test to liquid-based cytology like as HPV-DNA test for the diagnosis of cervical neoplasia, because it shows similar diagnostic accuracy as compared with HPV-DNA test using HC2 assay.;목적: 비정상 ThinPrep^(??)을 보이는 환자에서 고위험 HPV DNA을 검출하고, ThinPrep^(??)에서 p16^(ink4a) 단백 발현 양상을 확인한 후, 이들과 자궁경부 조직진단 사이의 상관관계를 분석하여, p16^(ink4a) 단백 발현 검사가 HPV DNA 검사처럼 자궁경부종양의 진단 정확도를 더 높일 수 있는 보조적 검사로서 사용될 수 있는지를 알아보고자 하였다. 연구 방법: 84명의 환자에서 시행한 ThinPrep^(??)(정상: 3 cases, ASCUS: 24 cases, LSIL: 30 cases, HSIL: 30 cases) 슬라이드와 같은 환자의 자궁경부 종양조직 슬라이드에서 각각 면역화학염색을 시행하여 p16^(ink4a) 단백 발현 양상을 분석하였으며, hybrid capture II system을 이용하여 고위험 HPV DNA를 검출하였다. 진단의 민감도, 특이도, 양성 예측도, 음성 예측도는 Kruskal-Wallis 검정법을 이용하였으며 저등급병변(ASCUS/LSIL)에서의 p16^(ink4a) 면역 화학 검사와 hybrid capture II system사이의 진단의 정확도의 비교는 McNemar's test를 이용하였다. 결과: ThinPrep^(??) 슬라이드에서 p16^(ink4a) 단백 발현 결과는 정상:0.0% ASCUS: 66.7%, LSIL:70.0%, HSIL:96.7%의 발현 빈도를 보였다. 한편 각각의 자궁경부 종양조직 슬라이드에서 p16^(ink4a) 단백 발현 결과는 정상(상피화생): 0.0%, CIN I:37.2%, CIN II:75.0%, CIN III:97.1%, SCC:100%를 보였다. 따라서 ThinPrep^(??) 및 조직 진단의 등급(grade)이 높을수록 p16^(ink4a) 단백 발현 빈도 및 발현 강도는 증가함을 보여 p16^(ink4a) 단백 발현과 자궁경부 종양의 grade 사이에는 높은 일치도를 보여 유의한 상관관계가 있음을 알 수 있었다. 한편 ThinPrep^(??)에서 저등급 병변을 보인 환자중 조직생검에서 고등급 병변(CIN II/II/SCC)을 진단하기 위해 p16^(ink4a) 단백 면역 화학 검사를 추가한 경우와 HPV 검사를 추가한 경우의 두 군으로 나누어 비교한 바, 각각의 자궁경부 조직의 진단 정확도는 민감도: 87.5% vs 68.8%, 특이도: 39.5% vs 26.3%, 양성 예측도: 37.8% vs 28.8%, 음성 예측도: 88.2% vs 66.7%를 보였으며, HPV 검사와 p16^(ink4a) 단백 면역 화학 검사사이의 진단의 정확도에는 큰 차이가 없음을 알 수 있었다. 결론: 비정상 ThinPrep^(??)을 보이는 환자에서 p16^(ink4a) 단백 면역 화학 검사는 HPV 검사와 비교할 때, 진단의 정확도에서 비슷한 결과를 보이는 것으로 판단된다. 따라서 비정상세포진을 보이는 환자 군에서 HPV 검사를 하기 어려운 상황에서는 p16^(ink4a) 단백 면역 화학 검사가 자궁경부종양의 정확한 진단을 위한 유용한 보조적 검사로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.