HPLC에 의한 단백질 분획의 분자량 고찰

Abstract

인삼을 추출·정제하여 항방사선작용이 있는 단백질분획으로부터, 전단백질과 subunit polypeptide를 Thin Layer Chromatography로 확인하고, High Performance Liquid Chromatography를 이용하여 그들의 분자량을 측정하였다. 즉, 인삼단백질의 정제를 위하여, Ammonium sulfate fractionation, CM - cellulose column chromatography, heat inactivation 및 Sephadex G-75 column chromatography를 실시하였다. 마지막 단계에서 얻은 세 분획인 G-Ⅰ, G-Ⅱ 및 G-Ⅲ에 대하여, 각 분획의 고유한 단백질과 SDS등의 처리에 의한 subunit polypeptide를 TLC와 HPLC로 비교ㆍ검토한 결과는 다음과 같다. G-Ⅰ분획은 TLC에 의해 3계의 spot을, HPLC에 의해 2개의 peak을 나타내었으며, 그들의 분자량은 각각 200,000 이상과 52,000이었다. 한편, SDS-TLC에 의해서는 3개의 spot을, SDS-HPLC에 의해서는 3개의 peak을 나타내었으며, 분자량은 각각 100,000 이상, 51,000 및 19,000이었다. G-Ⅱ분획의 경우 HPLC에 의한 1개의 주된 peak은 분자량 41,000인 단백질을 나타낸 것이며, SDS-HPLC에 의한 1개의 주된 Peak은 분자량 21,000인 subunit polypeptipe를 나타낸 것으로써, G-Ⅲ의 단백질은 dimer로 추정되었다. G-Ⅲ분획은 TLC에 의해 1개의 spot을, HPLC에 의해 3개의 Peak을 나타내었으며. 그들의 분자량은 각각 28,000, 19,000 및 15,000이었다. 한편, SDS-TLC에 의해서 2개의 spot을 SDS -HPLC에 의해서 2개의 peak을 나타내었으며, 분자량은 각각 19,000과 15,000이었다.;Ginseng proteins were extracted and partially purified by the methods of ammonium sulfate fractionation, CM-cellulose column chromatography, heat inactivation and Sephadex G-75 column chromatography. The final three fractions obtained (G-I G-Ⅱ and G-Ⅲ) were subjected to Thin Layer Chromatography and High Performance Liquid Chromatography, After created with SDS and β-Mercaptoethanol, the three fractions were studied by the same procedures of TLC and HPLC. The results are as follows; 1) G-I fraction showed three spots and two peaks of proteins with their M.W. of above 200,000 and 52,000. In SDS condition, it showed three spots and three peaks of polypeptides with their M.W. of above 100,000, 51,000and 19,000. 2) On the other hand, G-Ⅱ fraction showed one protein with the M.W, of 41,000 and one polypeptide with the M.W. of 21,000. So it seems that G-Ⅱ protein is a dimer. 3) G-Ⅲ fraction showed one spot and three peaks of proteins with their M.W. of 28,000, 19,000 and 15,000. In SDS condition, it showed two spots and two peaks of polypeptides with their M.W. of 19,000 and 15,000.