무가당 시럽제 중 tacrolimus의 안정성 연구

Abstract

Tacrolimus는 일차적 면역억제제로서 우수한 효과가 인정되어 그 사용이 증가하고 있다. Tacrolimus의 상용량은 0.075 ~ 0.2 mg/kg/ day로 질환, 신장기능 및 체중에 따라 다양한 용량이 요구되나, 현재 시판되고 있는 tacrolimus의 경구용 규격화 제형은 0.5, 1, 5 mg 3가지 에 불과하며, 아직 시럽제는 상품화되지 않았다. 지금까지의 연구에서 대부분 당이 함유된 용제를 가지고 tacrolimus의 안정성을 연구하였는데, 장기이식 후 발생되는 당뇨병(Post Transplantation Diabetes Mellitus)을 고려하였을 때 당이 함유되지 않은 용제를 사용한 시럽제 안정성의 연구는 절대적으로 필요하다 할 수 있다. 이에 본 연구에서는 무가당 시럽인 Ora-Plus○R와 Ora-Sweet Sugar Free○R를 각각 1 : 1의 비율로 혼합한 용제에 tacrolimus를 혼합하여 물리, 화학적 안정성을 검토하였다. Tacrolimus의 농도는 더욱 세밀한 치료혈중농도 획득을 가능하게 하고 적용시 투여량의 오차를 줄이기 위해 0.1과 0.5 mg/mL로 정하였다. 0.1, 0.5 mg/mL tacrolimus 시럽은 1 mg tacrolimus 캡슐 각각 9, 45개의 내용물을 Ora-Plus○R와 Ora-Sweet SF○R 1 : 1 용제와 혼합하여 최종 부피가 90 mL가 되게 하여 조제하였다. 각각 6개의 polypropylene plastic 병에 균등하게 나누어 담아 60일간 3병은 냉장, 3병은 상온에 보관하였다. 모든 병에서 조제 직후, 1, 3, 7, 14, 28, 45, 60일에 각각 0.5 mL의 검체를 취하였다. Tacrolimus는 용매분리에 의해 추출하였으며, 상징액을 HPLC법으로 분석하였다. 매 실험시 냄새와 색을 기록하였으며, pH meter기로 pH를 측정하였다. 가혹시험으로 tacrolimus는 모두 분해되어 본 연구조건으로 분해산물이 tacrolimus 유지시간대에 나타나지 않는 것으로 확인되었다. Tacrolimus 농도에 대한 피크면적을 대응하여 작성한 검량선은 30 ~ 600 µg/mL(R2 = 0.9992) 범위에서 양호한 직선성을 나타내었으며, 일간/일내 정밀성은 4.7% 이하로 본 분석법이 tacrolimus의 안정성 시험을 위한 충분한 정밀성을 갖고 있음을 알 수 있었다. Tacrolimus의 유지시간은 5.6분대로 나타났다. 무가당 시럽제 중에서 tacrolimus의 안정성 시험을 한 결과, 0.1과 0.5 mg/mL 농도에서 60일간 냉장 및 상온 보관하여 93% 이상의 약물의 함량이 유지되었고 pH의 유의한 변화도 관찰되지 않았다. 이상의 결과로 무가당 용제인 Ora-Plus○R와 Ora-Sweet SF○R (1 : 1) 혼합용제 중 0.1, 0.5 mg/mL tacrolimus를 P.P. plastic 병에 보관하였을 때, 최소 60일간 냉장 및 상온에서 물리적, 화학적으로 안정한 것으로 판단된다.;The use of tacrolimus is increasing, as its excellent effect as an immunosuppressive agent has been recognized. Although various doses are required depending on disease, kidney function and weight with the average dose of tacrolimus being 0.075 ~ 0.2 mg/kg/day, the oral standard dosage form of tacrolimus currently is commercially available in only three-type capsules, 0.5, 1, and 5 mg, and oral liquid formulation has not yet been commercialized. While most of studies so far have examined the stability of tacrolimus having a vehicle that contains sugar, when considering Post Transplantation Diabetes Mellitus, it is absolutely needed to carry out a stability study of syrup using a vehicle that doesn’t contain sugar. Thus, in this study, we added tacrolimus into the mixture of Ora-Plus and Ora-Sweet SF and examined its physical and chemical stability. In order to be able to acquire a further minute-treatment serum concentration and to minimize the error of dosage at time of application, we decided the concentration of tacrolimus as 0.1 and 0.5 mg/mL and kept it in a refrigerator as well as at room temperature by using a polypropylene resin plastic bottle. Suspensions of tacrolimus 0.1 and 0.5 mg/mL were prepared by mixing the contents of commercially available 1-mg capsules of tacrolimus with sugar-free syrup to make a final volume of 90 mL, respectively. Three samples of each concentration were stored at 4 ℃ in a refrigerator and the other group at 25℃ in a temperature-controlled water bath. A 0.5-mL sample was withdrawn from each of the bottles immediately and after 1, 3, 7, 14, 28, 45 and 60 days. Before inspection and sample withdrawal, each container was vigorously shaken by hand. After tacrolimus was extracted with acetonitrile, the upper layer was analyzed by using high-performance liquid chromatographic method. The color and odor of the samples were inspected; the pH of the samples was also measured at each testing interval The chromatographic analysis after deliberate degradation showed no evidence of any breakdown product likely to interfere with the chromatographic peak of tacrolimus. The relation between tacrolimus concentration and peak area is linear from 30 to 600 µg/mL (R2=0.9992). This analysis method was precise, with coefficients of variation no greater than 4.7%. The retention time of tacrolimus was 5.6 minute. The result of the stability test of tacrolimus in sugar-free syrup showed that more than 93 % of initial tacrolimus concentration was remained for 60 days at 4 and 25 ℃ and there was no significant change in pH. Based on the results, it was concluded that tacrolimus at the concentrations of 0.1 and 0.5mg/mL in equal amounts of Ora-Plus and Ora-Sweet SF was physically and chemically stable in both states of refrigerator and room temperature for at least 60 days